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公开(公告)号：CN118726276A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410729995.9
申请日：2024-06-06
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181E及其应用，以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProE‑R和HCProE‑F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为谷氨酸，获得弱毒突变体pPasFru‑R181E；本发明通过将TelMV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为谷氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控TelMV提供新疫苗。
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公开(公告)号：CN116676250A
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202310267350.3
申请日：2023-03-20
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明涉及一种百香果叶肉原生质体的分离和转化方法，以百香果子叶为实验材料，利用酶裂解法获得活性较高的叶肉原生质体，随后利用PEG介导的转化方法将外源基因高效转入百香果原生质体进行瞬时表达。包括(1)分离，选取生长状况良好的百香果植株子叶，去除下表皮；将除去下表皮的子叶放入酶解液中，得到含叶肉原生质体的酶解混合液；洗涤酶解混合液、过滤离心得到原生质体沉淀，重悬后获得原生质体悬浮液。(2)转化，利用PEG介导的转化方法成功将带有GFP标签的质粒转化到百香果原生质体中，转化效率达到60％。本发明建立了第一个高效的百香果原生质体分离和转化方法。该方法将应用于百香果的各种生物学研究，如基因功能分析、基因组编辑、蛋白质转运与定位、蛋白质‑蛋白质相互作用等。
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公开(公告)号：CN118546966A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410665383.8
申请日：2024-05-27
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181D及其应用，其以Te l MV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProD‑R和HCProD‑F为引物，使用Phus ion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，利用Pst I、Sa l I双酶切ad片段以及pPasFru质粒，通过T4DNA连接酶将片段与载体进行连接，连接产物转化至大肠杆菌DH10B，获得弱毒疫苗pPasFru‑R181D；本发明通过将Te l MV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为天冬氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控Te l MV提供了新途径。
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公开(公告)号：CN118726277A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410730008.7
申请日：2024-06-06
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181K及其应用，以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProK‑R和HCProK‑F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒突变体pPasFru‑R181K；本发明通过将TelMV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控TelMV提供了新途径。
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