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公开(公告)号：CN118726277A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410730008.7
申请日：2024-06-06
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181K及其应用，以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProK‑R和HCProK‑F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒突变体pPasFru‑R181K；本发明通过将TelMV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为赖氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控TelMV提供了新途径。
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公开(公告)号：CN118667773A
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202411009655.5
申请日：2024-07-26
Applicant: 海南大学
IPC: C12N7/01 , C12N7/04 , C12N15/29 , A01N63/40 , A01P1/00 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/82 , C12R1/94
Abstract: 本发明公开了一种兼抗两种黄灯笼辣椒病毒的弱毒疫苗及其应用，属于植物保护技术领域。本发明通过将PVMV 6K1蛋白上第15位丙氨酸(A)突变为甘氨酸(G)的方式获得致病力明显减弱的弱毒疫苗，同时该弱毒疫苗能够预防上述两种病毒的侵染，实现对PVMV、ChiVMV的交叉保护，为田间防抗黄灯笼辣椒病毒提供新途径。
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公开(公告)号：CN116676250A
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202310267350.3
申请日：2023-03-20
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明涉及一种百香果叶肉原生质体的分离和转化方法，以百香果子叶为实验材料，利用酶裂解法获得活性较高的叶肉原生质体，随后利用PEG介导的转化方法将外源基因高效转入百香果原生质体进行瞬时表达。包括(1)分离，选取生长状况良好的百香果植株子叶，去除下表皮；将除去下表皮的子叶放入酶解液中，得到含叶肉原生质体的酶解混合液；洗涤酶解混合液、过滤离心得到原生质体沉淀，重悬后获得原生质体悬浮液。(2)转化，利用PEG介导的转化方法成功将带有GFP标签的质粒转化到百香果原生质体中，转化效率达到60％。本发明建立了第一个高效的百香果原生质体分离和转化方法。该方法将应用于百香果的各种生物学研究，如基因功能分析、基因组编辑、蛋白质转运与定位、蛋白质‑蛋白质相互作用等。
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公开(公告)号：CN110643579B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN201810781285.5
申请日：2018-07-17
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种槟榔坏死环斑病毒，该病毒命名为槟榔坏死环斑病毒ANRSV‑XC1，藏编号为CCTCC NO：V201829。本发明还提供了该病毒的检测方法，包含三方面：确立了核酸检测所需要的引物序列；确立了检测反应种类；确立了检测反应体系和反应条件。本发明从槟榔叶片中分离到的病毒，与已报道的马铃薯Y病毒科病毒都有显著不同，为马铃薯Y病毒科的一个新病毒属，为研究槟榔坏死环斑病提供了研究基础，在科学研究及经济作物保护上有较大的使用价值。而且本发明的检查方法能够准确快速地检测出该病毒，高效可靠，在科学研究及经济作物保护上也具有较大的价值。
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公开(公告)号：CN118726276A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202410729995.9
申请日：2024-06-06
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181E及其应用，以TelMV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProE‑R和HCProE‑F为引物，使用Phusion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，再进行PstI、SalI双酶切和连接反应，反应产物转化大肠杆菌DH10B，使HCPro的第181位精氨酸突变为谷氨酸，获得弱毒突变体pPasFru‑R181E；本发明通过将TelMV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为谷氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控TelMV提供新疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110423762B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201910756897.3
申请日：2019-08-16
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种PVMV侵染性全长cDNA克隆的构建方法。本发明方法包括如下：利用密码子的简并性，将甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列的第2363位的A替换为C，得SEQ ID No.1；根据SEQ ID No.1中存在的两个单一限制性内切酶AatII和BamH I的识别位点，将SEQ ID No.1分成三段；制备得到三个片段并将其克隆到同一个植物表达载体中，得到含有SEQ ID No.1的重组表达载体即为甜椒脉斑驳病毒侵染性全长cDNA克隆。利用该方法能以低成本，快速高效地构建出PVMV侵染性克隆，本发明为日后防治相关病害提供理论依据。
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公开(公告)号：CN110643580A
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201810781427.8
申请日：2018-07-17
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种槟榔坏死梭斑病毒，该病毒命名为槟榔坏死梭斑病毒ANSSV-Baoting，藏编号为CCTCC NO：V201828。本发明还提供了该病毒的检测方法，包含三方面：确立了核酸检测所需要的引物序列；确立了检测反应种类；确立了检测反应体系和反应条件。本发明从槟榔叶片中分离到的病毒，与已报道的马铃薯Y病毒科病毒都有显著不同，为马铃薯Y病毒科的一个新病毒属，为研究槟榔坏死梭斑病提供了研究基础，在科学研究及经济作物保护上有较大的使用价值。而且本发明的检查方法能够准确快速地检测出该病毒，高效可靠，在科学研究及经济作物保护上也具有较大的价值。
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公开(公告)号：CN118546966A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410665383.8
申请日：2024-05-27
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种抗夜来香花叶病毒的弱毒疫苗R181D及其应用，其以Te l MV侵染性克隆质粒pPasFru为模板，以HCPro‑F、HCPro‑R、HCProD‑R和HCProD‑F为引物，使用Phus ion高保真DNA聚合酶进行扩增，获得大小分别为1278bp和117bp的ab和cd片段，再以ab和cd片段的混合物为模板，获得大小为1359bp的ad片段，利用Pst I、Sa l I双酶切ad片段以及pPasFru质粒，通过T4DNA连接酶将片段与载体进行连接，连接产物转化至大肠杆菌DH10B，获得弱毒疫苗pPasFru‑R181D；本发明通过将Te l MV HCPro蛋白的第181位精氨酸突变为天冬氨酸，获得弱毒疫苗，弱毒疫苗接种百香果植株后不表现症状但病毒含量仍较高，该弱毒疫苗作用稳定，可以起到有效的交叉保护作用，为田间防控Te l MV提供了新途径。
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公开(公告)号：CN115584353A
公开(公告)日：2023-01-10
申请号：CN202210657380.0
申请日：2022-06-10
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种夜来香花叶病毒(TelMV)侵染性克隆及其构建方法，将SEQIDNo：1分成N1、N2、M和C四段，扩增得到四个片段，克隆到同一个植物表达载体中，得到重组表达载体。本发明构建了TelMV侵染性全长cDNA克隆，能够成功侵染实验寄主本氏烟，并实现对自然宿主百香果的侵染。本发明能够快速、高效的构建出TelMV的侵染性克隆，有利于后续探究TelMV的生物学特性、致病机制和与寄主之间的相互作用，为日后防治相关病害提供理论依据。
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公开(公告)号：CN110643580B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN201810781427.8
申请日：2018-07-17
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，提供了一种槟榔坏死梭斑病毒，该病毒命名为槟榔坏死梭斑病毒ANSSV‑Baoting，藏编号为CCTCC NO：V201828。本发明还提供了该病毒的检测方法，包含三方面：确立了核酸检测所需要的引物序列；确立了检测反应种类；确立了检测反应体系和反应条件。本发明从槟榔叶片中分离到的病毒，与已报道的马铃薯Y病毒科病毒都有显著不同，为马铃薯Y病毒科的一个新病毒属，为研究槟榔坏死梭斑病提供了研究基础，在科学研究及经济作物保护上有较大的使用价值。而且本发明的检查方法能够准确快速地检测出该病毒，高效可靠，在科学研究及经济作物保护上也具有较大的价值。
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