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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102533758B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201110317404.X
申请日：2011-10-19
Applicant: 海南大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/68
Abstract: 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细胞系稳定细胞系；通过荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白表达的荧光强度，流式细胞术检测其蛋白表达水平，蛋白质印迹鉴定其干扰效果，筛选出能高效抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子。本发明为进一步应用核糖核酸干扰技术通过抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14的表达，增强水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的能力奠定了重要基础。
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公开(公告)号：CN102778570B
公开(公告)日：2014-11-05
申请号：CN201210185198.6
申请日：2012-06-05
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，并用嘌呤霉素筛选出阳性克隆，构建稳定细胞系siRNA-224.3、siRNA-NC；最后，应用酶联免疫吸附实验检测分别用平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖刺激条件下表达该小干扰核糖核酸分子的小鼠单核巨噬细胞稳定细胞系细胞上清中的一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，通过比较其差异，实现鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本发明的方法相比现有技术更加方便，准确性更高。
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公开(公告)号：CN102363781A
公开(公告)日：2012-02-29
申请号：CN201110317490.4
申请日：2011-10-19
Applicant: 海南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12Q1/68 , G01N33/53
Abstract: 本发明的一种能有效抑制小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子，其核糖核酸分子序列信息是：正义，gggcaguucacugauauuatt(5’-3’)，反义，uaauaucagugaacugccctt(5’-3’)，其通过生物学方法筛选得到的步骤是：合成不同的针对膜结合型白细胞分化抗原14的小干扰核糖核酸分子；按照高效转染试剂操作方法，将这些小干扰核糖核酸分子转染小鼠巨噬细胞；实时荧光定量聚合酶链式反应，检测膜结合型白细胞分化抗原14信使核糖核酸的表达水平；进行蛋白质印迹检测膜结合型白细胞分化抗原14蛋白表达水平以确定干扰效果；最后筛选得到了本发明的小干扰核糖核酸分子。本发明的小干扰核糖核酸分子，能特异且高效阻断膜结合型白细胞分化抗原14蛋白表达。
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公开(公告)号：CN102778570A
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201210185198.6
申请日：2012-06-05
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，并用嘌呤霉素筛选出阳性克隆，构建稳定细胞系siRNA-224.3、siRNA-NC；最后，应用酶联免疫吸附实验检测分别用平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖刺激条件下表达该小干扰核糖核酸分子的小鼠单核巨噬细胞稳定细胞系细胞上清中的一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，通过比较其差异，实现鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本发明的方法相比现有技术更加方便，准确性更高。
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公开(公告)号：CN102533758A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201110317404.X
申请日：2011-10-19
Applicant: 海南大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/68
Abstract: 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细胞系稳定细胞系；通过荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白表达的荧光强度，流式细胞术检测其蛋白表达水平，蛋白质印迹鉴定其干扰效果，筛选出能高效抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子。本发明为进一步应用核糖核酸干扰技术通过抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14的表达，增强水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的能力奠定了重要基础。
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