公开(公告)号：CN115232880B

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202210528454.0

申请日：2022-05-16

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  陈巧玲 ,  陈思 ,  满初日嘎 ,  张文灿 ,  侯思梦 ,  杜丽

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6837 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/11 ,  G16B20/00 ,  G16B40/00

Abstract: 本发明公开了一种海南黑山羊液相芯片及其应用，根据位点筛选要求和探针设计原则，其中包括803个SNP位点，可以基于目标区间基因组序列液相捕获的精准定位测序分型技术实现山羊基因分型。本发明的海南黑山羊液相芯片可用于海南黑山羊血统分析、山羊遗传多样性评估、种质资源和亲缘关系鉴定、遗传图谱构建及基因定位、全基因组关联分析、山羊分子标记辅助育种。本发明的海南黑山羊液相芯片，可以实现低成本基因分型，主要是对海南黑山羊具有专属性，可实现海南黑山羊的品种鉴定及亲缘关系分析，科学引导海南黑山羊杂交改良工作，助力海南黑山羊种质资源的保护和开发，并在山羊育种中的多个领域均具有较高的应用价值。

公开(公告)号：CN109666071A

公开(公告)日：2019-04-23

申请号：CN201910152350.2

申请日：2019-02-28

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  黄海峰 ,  杜丽

IPC: C07K16/12 ,  C07K16/06

Abstract: 本发明公开了一种巴氏杆菌蛋白的多克隆抗体及单克隆抗体的制备，采用BCA蛋白浓度方法构建标准蛋白浓度的标准曲线，通过标准曲线计算待测toxA-N纯化蛋白的浓度，制备抗原，再进行多杀性巴氏杆菌毒素toxA-N蛋白多克隆抗体和单克隆抗体的制备。通过生物技术方法将纯化后的toxA-N蛋白制备成抗原，通过对大白兔的皮下注射及昆明鼠的腹腔注射，刺激机体发生免疫应答，产生对应宿主的抗体。将制备多克隆抗体进行倍比稀释，在1:6400时P/N仍然>2，而单克隆抗体因其特异性高，稀释至1:64000时P/N依旧>2.5，完全符合制备抗体的要求。

公开(公告)号：CN106290866A

公开(公告)日：2017-01-04

申请号：CN201610673256.8

申请日：2016-08-16

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  杜丽 ,  赵天靖

IPC: G01N33/569 ,  C12N15/37 ,  C12N15/70

CPC classification number: G01N33/6854 ,  C07K14/025

Abstract: 本发明公开了一种牛乳头状瘤病毒13型抗体的间接ELISA检测方法，步骤包括：步骤1、构建重组表达质粒pET28a-L1，以BPV13基因组为模板，针对BPV13衣壳蛋白L1基因序列设计特异性引物；通过PCR反应得到目的片段，对原核表达载体pET28a和目的片段同时双酶切，连接后得到重组表达质粒pET28a-L1；步骤2、对目的蛋白进行表达及纯化；步骤3、建立BPV13抗体的间接ELISA检测体系，针对BPV13L1蛋白样本阴阳性临界值，进行判定。本发明的方法，步骤简单，准确率高。

公开(公告)号：CN102778570A

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201210185198.6

申请日：2012-06-05

Applicant: 海南大学

Inventor： 杜丽 ,  王凤阳 ,  焦寒伟 ,  雷明

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖的方法，首先合成能有效干扰小鼠mCD14基因表达的小干扰核糖核酸分子(siRNA-224.3)及阴性对照siRNA-NC，并制备成重组慢病毒；其次，将慢病毒感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，并用嘌呤霉素筛选出阳性克隆，构建稳定细胞系siRNA-224.3、siRNA-NC；最后，应用酶联免疫吸附实验检测分别用平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖刺激条件下表达该小干扰核糖核酸分子的小鼠单核巨噬细胞稳定细胞系细胞上清中的一氧化氮、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，通过比较其差异，实现鉴别平滑型脂多糖和粗糙型脂多糖。本发明的方法相比现有技术更加方便，准确性更高。

公开(公告)号：CN102533758A

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN201110317404.X

申请日：2011-10-19

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  杜丽 ,  雷明 ,  焦寒伟 ,  成鹰 ,  张冬琳 ,  郝永昌

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明的一种抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子，通过建立稳定表达增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白的人胚肾293细胞系，合成不同小核糖核酸分子，并转染人胚肾293细胞系稳定细胞系；通过荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白EGFP-水牛膜结合型白细胞分化抗原14融合蛋白表达的荧光强度，流式细胞术检测其蛋白表达水平，蛋白质印迹鉴定其干扰效果，筛选出能高效抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14基因表达的小核糖核酸分子。本发明为进一步应用核糖核酸干扰技术通过抑制水牛膜结合型白细胞分化抗原14的表达，增强水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的能力奠定了重要基础。

公开(公告)号：CN120028541A

公开(公告)日：2025-05-23

申请号：CN202411939087.9

申请日：2024-12-26

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  陈思 ,  满初日嘎 ,  陈巧玲 ,  高宏岩 ,  杜丽 ,  牛世华 ,  蒙勇

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/531 ,  C12M1/34 ,  G16B40/20 ,  G06F18/10 ,  G06F18/27

Abstract: 本发明公开了评估羊抗布鲁氏菌病性状的方法，具体为：按羊的体重比例分别感染等量病原，感染方式为点眼；于感染后30天采集血清用于血清布鲁氏菌抗体水平及血清IL‑12、IL‑17细胞因子的测定，另取感染对象的左侧腮腺淋巴结、右侧腮腺淋巴结进行大体病理半定量评价，对左侧腮腺淋巴结、左侧颌下淋巴结进行载菌量测定；将测得的数据进行标准化处理，用逐步回归分析法计算得到羊的抗布鲁氏菌病指数R，用以评估羊的抗病性状。本发明针对构建了综合评价羊的抗布鲁氏菌病性状指数，使评价结果更准确，克服了单项免疫指标评判抗病性状的局限性与不确定性。

公开(公告)号：CN117568486A

公开(公告)日：2024-02-20

申请号：CN202311538331.6

申请日：2023-11-17

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  高宏岩 ,  陈思 ,  陈巧玲 ,  吴慧 ,  蒙勇 ,  焦玉清 ,  满初日嘎 ,  杜丽

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了兴隆水牛液相芯片，该芯片的基因分型对象包括1208个SNP位点，1208个SNP位点定位于水牛参考基因组CUSA_SWP上。该兴隆水牛液相芯片能应用在兴隆水牛血统分析、水牛遗传多样性评估、种质资源和亲缘关系鉴定、遗传图谱构建及基因定位、全基因组关联分析和水牛分子标记辅助育种中。

公开(公告)号：CN115198023B

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202210945170.1

申请日：2022-08-08

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  陈思 ,  陈巧玲 ,  满初日嘎 ,  杨伟杰 ,  李昊洋 ,  张文灿 ,  杜丽

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种海南黄牛液相育种芯片及其应用，该芯片的基因分型对象主要包括这518个SNP位点，SNP定位于NCBI牛参考基因组(Bos_taurus_UMD_3.1.1)。该海南黄牛液相育种芯片可应用于海南黄牛血统分析、遗传多样性评估、种质资源和亲缘关系鉴定、遗传图谱构建及基因定位、全基因组关联分析、分子标记辅助育种。本发明的海南黄牛液相育种芯片对海南黄牛具有专属性，可快速实现海南黄牛的基因型分析及品种鉴定，科学引导海南黄牛杂交改良工作，助力海南黄牛种质资源的保护和开发。

公开(公告)号：CN115198023A

公开(公告)日：2022-10-18

申请号：CN202210945170.1

申请日：2022-08-08

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  陈思 ,  陈巧玲 ,  满初日嘎 ,  杨伟杰 ,  李昊洋 ,  张文灿 ,  杜丽

IPC: C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种海南黄牛液相育种芯片及其应用，该芯片的基因分型对象主要包括这518个SNP位点，SNP定位于NCBI牛参考基因组(Bos_taurus_UMD_3.1.1)。该海南黄牛液相育种芯片可应用于海南黄牛血统分析、遗传多样性评估、种质资源和亲缘关系鉴定、遗传图谱构建及基因定位、全基因组关联分析、分子标记辅助育种。本发明的海南黄牛液相育种芯片对海南黄牛具有专属性，可快速实现海南黄牛的基因型分析及品种鉴定，科学引导海南黄牛杂交改良工作，助力海南黄牛种质资源的保护和开发。

公开(公告)号：CN115232880A

公开(公告)日：2022-10-25

申请号：CN202210528454.0

申请日：2022-05-16

Applicant: 海南大学

Inventor： 王凤阳 ,  陈巧玲 ,  陈思 ,  满初日嘎 ,  张文灿 ,  侯思梦 ,  杜丽

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6837 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/11 ,  G16B20/00 ,  G16B40/00

Abstract: 本发明公开了一种海南黑山羊液相芯片及其应用，根据位点筛选要求和探针设计原则，其中包括803个SNP位点，可以基于目标区间基因组序列液相捕获的精准定位测序分型技术实现山羊基因分型。本发明的海南黑山羊液相芯片可用于海南黑山羊血统分析、山羊遗传多样性评估、种质资源和亲缘关系鉴定、遗传图谱构建及基因定位、全基因组关联分析、山羊分子标记辅助育种。本发明的海南黑山羊液相芯片，可以实现低成本基因分型，主要是对海南黑山羊具有专属性，可实现海南黑山羊的品种鉴定及亲缘关系分析，科学引导海南黑山羊杂交改良工作，助力海南黑山羊种质资源的保护和开发，并在山羊育种中的多个领域均具有较高的应用价值。