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公开(公告)号：CN114645030B
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202210371099.0
申请日：2022-04-08
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体及其在制备西塞卡纳药物中间体的应用，涉及分子生物学技术领域。一种ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω‑转氨酶突变所得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：V149A/R128L/L182V/D224K、V149A/R128L/L182F/D224K或V149A/L182F/L187F/D224K中的至少一种。本发明基于一种催化口袋疏水氨基酸的位阻效应，确定需要突变的氨基酸残基位点，结合高通量显色的定量筛选方法，通过定点突变技术进行实验验证，该方法可有效地提高突变氨基酸位点的筛选概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性、酶活性明显优于野生酶的突变酶。
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公开(公告)号：CN112391372B
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202011294113.9
申请日：2020-11-18
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因工程菌及其应用。该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明通过蛋白质工程改造植物乳杆菌源的谷氨酸脱羧酶，拓宽了该蛋白催化pH活性范围；改造后的GadB基因与GadC基因共同连接于pNZ8149载体中，在乳酸乳球菌NZ3900中表达；在发酵罐中培养重组菌株L.lactis NZ3900/pNZ8149‑gadBΔC11C，用于转化谷氨酸钠生产食品级GABA，转化周期48h，产量高达33.52g/L，谷氨酸钠摩尔转化率达到91.64％；为基于乳酸菌代谢改造及发酵技术制备食品级GABA提供了优良菌株和方法支撑。
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公开(公告)号：CN112391372A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN202011294113.9
申请日：2020-11-18
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因工程菌及其应用。该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明通过蛋白质工程改造植物乳杆菌源的谷氨酸脱羧酶，拓宽了该蛋白催化pH活性范围；改造后的GadB基因与GadC基因共同连接于pNZ8149载体中，在乳酸乳球菌NZ3900中表达；在发酵罐中培养重组菌株L.lactis NZ3900/pNZ8149‑gadBΔC11C，用于转化谷氨酸钠生产食品级GABA，转化周期48h，产量高达33.52g/L，谷氨酸钠摩尔转化率达到91.64％；为基于乳酸菌代谢改造及发酵技术制备食品级GABA提供了优良菌株和方法支撑。
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公开(公告)号：CN112359030A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011344825.7
申请日：2020-11-26
Applicant: 浙江科技学院 , 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω‑转氨酶突变所得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：E133Q、D224K、D231A、E253A或D268K中的至少一种。本发明筛选得到的ω‑转氨酶突变体在热力学稳定性、酶活性方面明显优于野生酶。
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公开(公告)号：CN112481230B
公开(公告)日：2021-12-07
申请号：CN202011415007.1
申请日：2020-12-04
Applicant: 浙江科技学院 , 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种通过DNA合成改组组合突变获得的ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的野生型ω‑转氨酶进行点突变而得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为以下任意一种：(1)F115L‑H210N‑M150C‑M280C；(2)F115L‑H210N；(3)F115L‑H210N‑E253A‑I295V；(4)I77L‑F115L‑E133A‑H210N‑N245D；(5)I77L‑Q97E‑F115L‑L118T‑E253A‑G292D；(6)I77L‑E133A‑N245D‑G292D；(7)H210N‑N245D‑E253A‑G292D。本发明通过DNA合成改组组合突变方法，将前期所得到的正向突变随机组合，通过实验验证，该方法可有效地提高正突变概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性明显优于野生酶的突变酶。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111607583B
公开(公告)日：2021-12-07
申请号：CN202010442372.5
申请日：2020-05-22
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因及应用。所述谷氨酸脱羧酶突变体由野生型谷氨酸脱羧酶第54位氨基酸残基由天冬氨酸突变为丙氨酸所得。本申请通过优化蛋白表面电荷方法对蛋白质进行改造，并结合定点突变技术，得到了催化性能更高的GAD突变体。与野生型相比，突变体D54A的kcat/Km是野生型的1.80倍，t1/2是野生型的14.76倍，T5015和Tm分别比野生型提高3.95℃和4.80℃。
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公开(公告)号：CN110144335B
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN201910343331.8
申请日：2019-04-26
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶双突变体及其应用，该ω‑转氨酶双突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明ω‑转氨酶双突变体由野生型的土曲霉(Aspergillus terreus)ω‑转氨酶第115位的苯丙氨酸突变成亮氨酸，第118位的亮氨酸突变成苏氨酸而获得；该ω‑转氨酶双突变体的半失活温度比野生型提高了8.8℃，热解折叠温度比野生型提高了7.7℃，在40℃时的半衰期较野生型延长了59.0min，是野生型的9.55倍。
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公开(公告)号：CN108913671B
公开(公告)日：2020-07-24
申请号：CN201810619322.2
申请日：2018-06-15
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体及其应用，该ω‑转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明ω‑转氨酶突变体由土曲霉(Aspergillus terreus)ω‑转氨酶77位的异亮氨酸、150位的甲硫氨酸、210位的组氨酸和280位的甲硫氨酸分别突变为亮氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和半胱氨酸获得，该ω‑转氨酶突变体的半失活温度(T5010)为50.3±0.5℃，比野生型提高了11.8℃，在40℃下的半衰期(t1/2)为114.6±2.8min，是野生型的16.6倍，热稳定性显著提高。
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公开(公告)号：CN110229805A
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201910572205.X
申请日：2019-06-28
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种通过序列一致性制备的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用，该谷氨酸脱羧酶突变体为下列之一：将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第383位的苏氨酸突变为赖氨酸；将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第163位的丙氨酸突变为丝氨酸。本发明通过序列一致性方法对GAD1407基因编码的氨基酸序列中出现频率最高(保留阈值在60％以上)的8个位点进行定点突变，筛选获得酶活力性和热稳定性显著高于野生型酶的谷氨酸脱羧酶突变体(突变体T383K和A163S)的t1/2分别是野生型的1.74和1.45倍，T5015分别比野生型提高了2.9℃和1.76℃。
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公开(公告)号：CN110144335A
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201910343331.8
申请日：2019-04-26
Applicant: 浙江科技学院
Abstract: 本发明公开了一种ω-转氨酶双突变体及其应用，该ω-转氨酶双突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明ω-转氨酶双突变体由野生型的土曲霉(Aspergillus terreus)ω-转氨酶第115位的苯丙氨酸突变成亮氨酸，第118位的亮氨酸突变成苏氨酸而获得；该ω-转氨酶双突变体的半失活温度比野生型提高了8.8℃，热解折叠温度比野生型提高了7.7℃，在40℃时的半衰期较野生型延长了59.0min，是野生型的9.55倍。
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