公开(公告)号：CN110305805B

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN201910549697.0

申请日：2019-06-24

Applicant: 浙江工业大学 ,  长兴制药股份有限公司

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  肖延铭 ,  华超 ,  汪钊 ,  祁瑛 ,  梁阿朋

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12P13/22 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母工程菌及其在合成左旋多巴中的应用。本发明的重组毕赤酵母工程菌通过如下方法获得：将SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列进行密码子优化后，转入到毕赤酵母GS115，构建重组毕赤酵母YZ001，随后将SEQ ID NO.4所示的HAC1在毕赤酵母YZ001中过量表达，构建获得重组毕赤酵母工程菌YZ002。本发明重组毕赤酵母工程菌发酵离心后的上清液可有效用于合成左旋多巴，离心后的菌体可以用于下一批次的发酵，这不仅提高了左旋多巴的合成效率和使用率、节约生产成本，并为左旋多巴的生产加工开辟新的工业化途径。

公开(公告)号：CN110331153A

公开(公告)日：2019-10-15

申请号：CN201910550766.X

申请日：2019-06-24

Applicant: 浙江工业大学 ,  长兴制药股份有限公司

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  肖延铭 ,  张飞龙 ,  汪钊 ,  祁瑛 ,  李敬亚

IPC: C12N15/60 ,  C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种克吕沃尔氏菌酪氨酸酚裂解酶突变体及其应用。本发本发明通过克隆来源于克吕沃尔氏菌的酪氨酸酚裂解酶基因，以及对酪氨酸酚裂解酶基因进行随机突变，并将突变的基因在大肠杆菌中进行表达，得到一株酶活大幅提高的工程菌YW021。本发明所提供的工程菌YW021合成左旋多巴的最大浓度浓度高达150g/L，与野生型比较提高了约30％，底物邻苯二酚的转化率达到99.9％以上。

公开(公告)号：CN110499259B

公开(公告)日：2021-07-27

申请号：CN201910661781.1

申请日：2019-07-22

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  孙杰 ,  汪钊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P7/40 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种解酯耶氏酵母YW100‑1及其应用，所述解酯耶氏酵母YW100‑1是在解酯耶氏酵母中过表达甘油代谢中甘油激酶GUT1，甘油激酶GUT2，甘油脱氢酶酶GCY1，二羟基丙酮激酶DAK1，二羟基丙酮激酶DAK2和NADH激酶POS5，同时敲除解酯耶氏酵母中二酰基甘油酰基转移酶基因DGA2和3‑磷酸甘油脱氢酶基因GPD2获得的。本发明菌株以甘油为碳源时，丙酮酸产量增加了66.2％，达到121.2g/L，为丙酮酸工业化生产提供了优良菌株。

公开(公告)号：CN110499259A

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201910661781.1

申请日：2019-07-22

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  孙杰 ,  汪钊

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P7/40 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种解酯耶氏酵母YW100-1及其应用，所述解酯耶氏酵母YW100-1是在解酯耶氏酵母中过表达甘油代谢中甘油激酶GUT1，甘油激酶GUT2，甘油脱氢酶酶GCY1，二羟基丙酮激酶DAK1，二羟基丙酮激酶DAK2和NADH激酶POS5，同时敲除解酯耶氏酵母中二酰基甘油酰基转移酶基因DGA2和3-磷酸甘油脱氢酶基因GPD2获得的。本发明菌株以甘油为碳源时，丙酮酸产量增加了66.2％，达到121.2g/L，为丙酮酸工业化生产提供了优良菌株。

公开(公告)号：CN110331153B

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN201910550766.X

申请日：2019-06-24

Applicant: 浙江工业大学 ,  长兴制药股份有限公司

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  肖延铭 ,  张飞龙 ,  汪钊 ,  祁瑛 ,  李敬亚

IPC: C12N15/60 ,  C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种克吕沃尔氏菌酪氨酸酚裂解酶突变体及其应用。本发本发明通过克隆来源于克吕沃尔氏菌的酪氨酸酚裂解酶基因，以及对酪氨酸酚裂解酶基因进行随机突变，并将突变的基因在大肠杆菌中进行表达，得到一株酶活大幅提高的工程菌YW021。本发明所提供的工程菌YW021合成左旋多巴的最大浓度浓度高达150g/L，与野生型比较提高了约30％，底物邻苯二酚的转化率达到99.9％以上。

公开(公告)号：CN110305805A

公开(公告)日：2019-10-08

申请号：CN201910549697.0

申请日：2019-06-24

Applicant: 浙江工业大学 ,  长兴制药股份有限公司

Inventor： 袁围 ,  钟爽 ,  肖延铭 ,  华超 ,  汪钊 ,  祁瑛 ,  梁阿朋

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/60 ,  C12N15/31 ,  C12P13/22 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了一种重组毕赤酵母工程菌及其在合成左旋多巴中的应用。本发明的重组毕赤酵母工程菌通过如下方法获得：将SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列进行密码子优化后，转入到毕赤酵母GS115，构建重组毕赤酵母YZ001，随后将SEQ ID NO.4所示的HAC1在毕赤酵母YZ001中过量表达，构建获得重组毕赤酵母工程菌YZ002。本发明重组毕赤酵母工程菌发酵离心后的上清液可有效用于合成左旋多巴，离心后的菌体可以用于下一批次的发酵，这不仅提高了左旋多巴的合成效率和使用率、节约生产成本，并为左旋多巴的生产加工开辟新的工业化途径。