公开(公告)号：CN118813571A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202411047728.X

申请日：2024-08-01

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 陈小龙 ,  朱林江 ,  卢昶鑫 ,  甘恬 ,  范永仙

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P19/44 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物催化领域，具体涉及蔗糖磷酸化酶突变体、编码基因及其在白藜芦醇葡萄糖苷中的应用。所述蔗糖磷酸化酶突变体由Bifidobacterium lactis或Bifidobacterium adolesc来源的蔗糖磷酸化酶其第135位精氨酸、第344位酪氨酸进行单突变或多点联合突变获得。蔗糖磷酸化酶突变体对白藜芦醇糖基化的比酶活是野生型的100～5000倍，且催化合成3‑α‑G‑Res的浓度可达到70g/L。底物(E)‑白藜芦醇的转化率>95％，而野生型酶的转化率仅为0.02％。合成的糖苷产物中，3‑α‑G‑Res纯度＞99％，表现出优良的区域选择性。蔗糖磷酸化酶突变体可以更好地应用于生物催化领域，对3‑α‑G‑Res的工业化生产及应用有重要意义。

公开(公告)号：CN114703158A

公开(公告)日：2022-07-05

申请号：CN202210230270.6

申请日：2022-03-10

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 陈小龙 ,  周瑶瑶 ,  朱林江 ,  陆跃乐 ,  甘恬 ,  范永仙

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/60 ,  C12P19/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种提高转糖基活性和提升L‑抗坏血酸葡萄糖苷产物L‑抗坏血酸‑2‑α‑葡萄糖苷（2‑O‑α‑D‑glucopyranosyl‑L‑ascorbic acid,AA‑2G）纯度的蔗糖磷酸化酶突变体及其应用。本发明通过对SEQ ID.1所示氨基酸序列第134位脯氨酸、第341位亮氨酸和第343位亮氨酸中的一种或多种进行单点突变或多点组合突变，使得蔗糖磷酸化酶突变体比酶活提升1~2倍，合成AA‑2G浓度可达205 g/L，合成L‑抗坏血酸糖苷产物中AA‑2G占比达92~99%，这些突变体具有更好的工业应用特性。

公开(公告)号：CN114703158B

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202210230270.6

申请日：2022-03-10

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 陈小龙 ,  周瑶瑶 ,  朱林江 ,  陆跃乐 ,  甘恬 ,  范永仙

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/60 ,  C12P19/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种提高转糖基活性和提升L‑抗坏血酸葡萄糖苷产物L‑抗坏血酸‑2‑α‑葡萄糖苷（2‑O‑α‑D‑glucopyranosyl‑L‑ascorbic acid,AA‑2G）纯度的蔗糖磷酸化酶突变体及其应用。本发明通过对SEQ ID.1所示氨基酸序列第134位脯氨酸、第341位亮氨酸和第343位亮氨酸中的一种或多种进行单点突变或多点组合突变，使得蔗糖磷酸化酶突变体比酶活提升1~2倍，合成AA‑2G浓度可达205 g/L，合成L‑抗坏血酸糖苷产物中AA‑2G占比达92~99%，这些突变体具有更好的工业应用特性。

公开(公告)号：CN111172127A

公开(公告)日：2020-05-19

申请号：CN202010053780.1

申请日：2020-01-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 陈小龙 ,  甘恬 ,  朱林江 ,  陆跃乐 ,  范永仙 ,  陈翰驰

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/75 ,  C12P19/18 ,  C12P19/44

Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶在制备甘油葡萄糖苷中的应用，将SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶基因lrsp克隆至枯草芽孢杆菌表达质粒上，构建重组质粒pP43-lrsp，并将其转化到表达菌株枯草芽孢杆菌WB800中，构建重组菌枯草芽孢杆菌WB800(pP43-lrsp)。该重组菌经过发酵，分泌型表达蔗糖磷酸化酶。将发酵液经过稀释后直接用于制备2-αGG，其以蔗糖作为糖基供体，以丙三醇作为糖基化受体，具有催化效率高，生产速率快的特点，30-40h内催化得到87-110g/L的2-αGG，平均生产强度大于2.1g·L-1·h-1。

公开(公告)号：CN111172128A

公开(公告)日：2020-05-19

申请号：CN202010071051.9

申请日：2020-01-21

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 陈小龙 ,  甘恬 ,  朱林江 ,  周瑶瑶 ,  陆跃乐 ,  陈翰驰 ,  范永仙

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12P19/60 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶在制备2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸中的应用，以含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌经发酵获得的发酵液或发酵液离心后的湿菌体用缓冲液重悬的破碎液为催化剂，以L-抗坏血酸为底物，以蔗糖为辅助底物，以pH为4.8-6.0的缓冲液为反应介质构成反应体系，在30-55℃的条件下进行反应，获得AA-2G。本发明采用蔗糖磷酸化酶高效生产AA-2G，其产率为3.47g·L-1·h-1，较现有报道的B.longum来源的蔗糖磷酸化酶提高了34.5％，AA-2G的最高浓度可达178g/L；本发明重组枯草芽孢杆菌能够高效分泌表达蔗糖磷酸化酶，将发酵液直接用于食品级AA-2G的制备。