公开(公告)号：CN113943781A

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202111208631.9

申请日：2021-10-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 林星宇 ,  颜玉华 ,  杨涛 ,  陆雅婷 ,  罗自生 ,  李莉

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/70 ,  C12R1/93 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种大体积液体样品中病原微生物的快速绝对定量方法，属于微生物检测技术领域。所述方法包括：(1)利用纳米孔径膜过滤待测液体样品，使目标微生物被截留在滤膜表面；(2)在截留了目标微生物的滤膜表面贴合上密封小室，加入环介导等温扩增反应体系，密封；反应体系中含有水凝胶单体，交联成胶使得反应体系呈胶态覆盖滤膜表面的目标微生物；(3)环介导等温核酸扩增反应；(4)利用荧光成像技术分析计数荧光点，计算目标微生物的绝对浓度。本发明利用径迹蚀刻膜截留和水凝胶反应体系对目标微生物双重纳米限域，使得细菌、病毒在初始位置扩增且其扩增产物不会扩散，形成形状鲜明的扩增荧光点，实现微生物的定量定位检测。

公开(公告)号：CN113943781B

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202111208631.9

申请日：2021-10-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 林星宇 ,  颜玉华 ,  杨涛 ,  陆雅婷 ,  罗自生 ,  李莉

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/70 ,  C12R1/93 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种大体积液体样品中病原微生物的快速绝对定量方法，属于微生物检测技术领域。所述方法包括：(1)利用纳米孔径膜过滤待测液体样品，使目标微生物被截留在滤膜表面；(2)在截留了目标微生物的滤膜表面贴合上密封小室，加入环介导等温扩增反应体系，密封；反应体系中含有水凝胶单体，交联成胶使得反应体系呈胶态覆盖滤膜表面的目标微生物；(3)环介导等温核酸扩增反应；(4)利用荧光成像技术分析计数荧光点，计算目标微生物的绝对浓度。本发明利用径迹蚀刻膜截留和水凝胶反应体系对目标微生物双重纳米限域，使得细菌、病毒在初始位置扩增且其扩增产物不会扩散，形成形状鲜明的扩增荧光点，实现微生物的定量定位检测。