公开(公告)号：CN104479007A

公开(公告)日：2015-04-01

申请号：CN201410656962.2

申请日：2014-11-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 杜爱芳 ,  程海卫 ,  杨怡 ,  陈学秋

IPC: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K1/34 ,  C07K1/10

CPC classification number: C07K14/765 ,  C07K14/77 ,  C07K14/795 ,  C07K19/00

Abstract: 本发明提供一种桔青霉毒素--蛋白载体人工偶联抗原的碳二亚胺合成法，采用水溶性1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）-碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）作为偶联剂。桔青霉毒素先进行活化，而后与偶联试剂相互反应，之后与蛋白载体进行偶联，最后经透析纯化得到桔青霉毒素—蛋白载体人工偶联抗原。本发明方法反应条件温和，能够生产出灵敏度高、特异性强、稳定性好的抗桔青霉毒素单克隆抗体；制备过程简便可行，耗时短，容易规模化生产和推广应用。

公开(公告)号：CN105037539B

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201510499973.9

申请日：2015-08-15

Applicant: 浙江大学

Inventor： 杜爱芳 ,  程海卫 ,  王素华 ,  赵现锋 ,  杨怡 ,  陈学秋 ,  陈一飞

IPC: C07K16/14 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供一种抗桔青霉毒素的单链抗体。本发明采用人工偶联抗原桔青霉毒素—BSA/BSA和桔青霉毒素—OVA/OVA抗原组合对抗体‑核糖体‑mRNA三联体复合体进行亲和筛选，采用原位RT‑PCR方法对亲和筛选产物进行回收，利用核糖体展示技术进行单链抗体的筛选，筛选到的基因片段经原核表达后应用ELISA方法进行鉴定获得。本发明大大简化了抗体的筛选和制备过程，减少了蛋白载体的干扰，提高了获得特异性单链抗体的机率；提高了回收产率。鉴于桔青霉毒素本身所具有的肾毒性、致畸性和致癌性，严重威胁了人类和家畜的健康，本发明提供的抗桔青霉毒素单链抗体可作为测定农产品和食品样品中桔青霉毒素污染残留检测所需试剂。

公开(公告)号：CN105037539A

公开(公告)日：2015-11-11

申请号：CN201510499973.9

申请日：2015-08-15

Applicant: 浙江大学

Inventor： 杜爱芳 ,  程海卫 ,  王素华 ,  赵现锋 ,  杨怡 ,  陈学秋 ,  陈一飞

IPC: C07K16/14 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供一种抗桔青霉毒素的单链抗体。本发明采用人工偶联抗原桔青霉毒素—BSA/BSA和桔青霉毒素—OVA/OVA抗原组合对抗体-核糖体-mRNA三联体复合体进行亲和筛选，采用原位RT-PCR方法对亲和筛选产物进行回收，利用核糖体展示技术进行单链抗体的筛选，筛选到的基因片段经原核表达后应用ELISA方法进行鉴定获得。本发明大大简化了抗体的筛选和制备过程，减少了蛋白载体的干扰，提高了获得特异性单链抗体的机率；提高了回收产率。鉴于桔青霉毒素本身所具有的肾毒性、致畸性和致癌性，严重威胁了人类和家畜的健康，本发明提供的抗桔青霉毒素单链抗体可作为测定农产品和食品样品中桔青霉毒素污染残留检测所需试剂。