公开(公告)号：CN105647962A

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201610085619.6

申请日：2016-02-15

Applicant: 浙江大学

Inventor： 边红武 ,  韩凝 ,  郭芾 ,  房克 ,  杨亦农 ,  朱睦元

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/00

CPC classification number: C12N15/8205 ,  C12N15/113 ,  C12N15/8216 ,  C12N2310/141 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10

Abstract: 本发明涉及水稻转基因材料的构建，旨在提供一种运用CRISPR-Cas9系统敲除水稻MIRNA393b茎环序列的基因编辑方法。包括：选择gRNA靶位点进行克隆和GG连接，扩增后酶切，再与pGREB32载体连接；然后转化大肠杆菌感受态细胞；将测序结果正确的质粒转化农杆菌，并介导转化水稻愈伤组织获得转基因植株，获得转基因阳性株系；收取T0代突变体植株种子，发苗，对T1代植株进行纯合体筛选；经miR393b表达检测为阴性的纯合株系，即为完全丧失miR393b茎环序列及其表达的水稻突变体。本发明能有效敲除小RNA的茎环序列，且可以制备同一小RNA家族不同成员的功能丧失突变体。该突变体植株进行扩繁大量种子，是成功获得研究水稻MIRNA393b基因功能的理想材料。