公开(公告)号：CN109280634B

公开(公告)日：2022-02-18

申请号：CN201811017201.7

申请日：2018-08-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 陈烨 ,  张璐雯 ,  管敏鑫

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种内耳毛细胞体外分离培养的方法，所述方法为：将耳蜗基底膜毛细胞面朝上放置在提前用层粘连蛋白包被的四孔细胞培养板上，然后加内耳毛细胞培养基，每间隔24小时更换培养液，获得内耳毛细胞；所述内耳毛细胞培养基为含体积终浓度2‑15％马血清、体积终浓度2‑15％胎牛血清、体积终浓度1‑2％N‑2细胞因子添加剂的高糖DMEM培养基。本发明方法可以更加高效的分离得到完整的耳蜗基底膜；利用本发明的培养条件，基底膜毛细胞的形态更接近在体状态，外毛以及内毛排列更完整；同时相比传统方法(10％胎牛血清的高糖DMEM培养基)，本发明方法可以延长基底膜毛细胞一倍以上的生存时间。

公开(公告)号：CN109280634A

公开(公告)日：2019-01-29

申请号：CN201811017201.7

申请日：2018-08-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 陈烨 ,  张璐雯 ,  管敏鑫

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种内耳毛细胞体外分离培养的方法，所述方法为：将耳蜗基底膜毛细胞面朝上放置在提前用层粘连蛋白包被的四孔细胞培养板上，然后加内耳毛细胞培养基，每间隔24小时更换培养液，获得内耳毛细胞；所述内耳毛细胞培养基为含体积终浓度2-15％马血清、体积终浓度2-15％胎牛血清、体积终浓度1-2％N-2细胞因子添加剂的高糖DMEM培养基。本发明方法可以更加高效的分离得到完整的耳蜗基底膜；利用本发明的培养条件，基底膜毛细胞的形态更接近在体状态，外毛以及内毛排列更完整；同时相比传统方法(10％胎牛血清的高糖DMEM培养基)，本发明方法可以延长基底膜毛细胞一倍以上的生存时间。