公开(公告)号：CN103421833A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201310350159.1

申请日：2013-08-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 余旭平 ,  沈琴芳 ,  刘江梅 ,  朱军莉 ,  牛冬 ,  姚学萍 ,  袁佳杰 ,  谭双

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/64 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/02 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种跨膜输出蛋白基因选择克隆载体及其构建方法和应用，克隆载体，包括原始载体以及插入该原始载体的启动子，所述的原始载体为pMBL，所述的启动子为阿拉伯糖启动子，该阿拉伯糖启动子位于pMBL载体中β-内酰胺酶基因的上游。本发明还提供了所述克隆载体的构建方法及应用。本发明的克隆载体，与宿主菌的相容性好，不仅能够筛选鉴定含活性启动子的跨膜输出蛋白基因，还能够筛选鉴定无启动子或者体内特殊信号诱导表达的跨膜输出蛋白基因，且筛选方法简单、便捷、成本低。

公开(公告)号：CN103468729A

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201310350028.3

申请日：2013-08-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 余旭平 ,  朱军莉 ,  刘江梅 ,  牛冬 ,  沈琴芳 ,  姚学萍 ,  袁佳杰 ,  谭双

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种跨膜输出蛋白基因选择克隆T载体及其应用。T载体，通过如下方法构建：将阿拉伯糖启动子插入pMBL载体中β-内酰胺酶基因的上游，得到重组克隆载体；在所述重组克隆载体的β-内酰胺酶基因与启动子之间引入两个Xcm I酶切位点，得到前T载体；限制性内切酶Xcm I酶切所述的前T载体，回收线性化载体，得到所述的T载体。本发明还公开了所述T载体在体外筛选跨膜输出蛋白基因中的应用。本发明的T载体，相容性好，连接效率高，能够以直接克隆随机PCR产物的方式选择性地克隆和筛选含有信号肽序列的跨膜输出蛋白基因，且进行筛选跨膜输出蛋白基因时，只需构建一个基因文库，操作便捷、成本低。