公开(公告)号：CN106906240A

公开(公告)日：2017-06-30

申请号：CN201710194580.6

申请日：2017-03-29

Applicant: 浙江大学

Inventor： 边红武 ,  曾章慧 ,  刘翠翠 ,  韩凝 ,  朱睦元

IPC: C12N15/82 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00

CPC classification number: C12N15/8213 ,  A01H4/00 ,  C12N9/1085 ,  C12Y205/01

Abstract: 本发明涉及大麦转基因材料的构建，旨在提供一种运用CRISPR‑Cas9系统敲除大麦VE合成通路中的关键基因HPT的方法。该方法包括下述步骤：gRNA靶位点的选择、gRNA片段的克隆、GG(gRNA‑gRNA)片段的连接、连接产物的PCR扩增、纯化产物和目标载体的酶切、纯化产物和目标载体的连接反应、连接产物转化大肠杆菌感受态、农杆菌介导的大麦转基因、阳性转基因植株的筛选、突变体测序。本发明利用先进的基因编辑技术‑CRISPR‑Cas9系统对大麦VE合成通路中的关键基因(HPT)进行靶向基因编辑，获得有效的功能缺失突变体，为大麦中生物活性物质的研究创造条件。