公开(公告)号：CN114711140B

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202111388155.3

申请日：2021-11-22

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 崔富强 ,  宋艳平

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种欧洲越橘愈伤组织再生体系的建立方法，该方法包括：以在无菌培养条件下生长良好的欧洲越橘苗的幼嫩枝条为外植体材料，接种至培养基中得到有愈伤的外植体，继续培养，生成不定芽；培养基配方为：WPM+3%蔗糖+1%琼脂+0.5 mg/L IBA+2.0 mg/L ZT,pH=5.2±0.02；不定芽长到2‑3 cm，移到生根培养基上诱导生根。生根培养基配方为WPM+2%蔗糖+1%琼脂+0.3 mg/L IAA+1.0 mg/L KT+0.50 g/L活性炭，pH=5.2±0.02，得到欧洲越橘再生苗。本发明针对欧洲越橘，愈伤组织和不定芽的获得率分别为100%和95%以上。本方法从外植体到获得土壤栽培苗只需要2‑3个月时间，也为欧洲越橘的无性系繁殖提供了技术支持。

公开(公告)号：CN114711140A

公开(公告)日：2022-07-08

申请号：CN202111388155.3

申请日：2021-11-22

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 崔富强 ,  宋艳平

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种欧洲越橘愈伤组织再生体系的建立方法，该方法包括：以在无菌培养条件下生长良好的欧洲越橘苗的幼嫩枝条为外植体材料，接种至培养基中得到有愈伤的外植体，继续培养，生成不定芽；培养基配方为：WPM+3%蔗糖+1%琼脂+0.5 mg/L IBA+2.0 mg/L ZT,pH=5.2±0.02；不定芽长到2‑3 cm，移到生根培养基上诱导生根。生根培养基配方为WPM+2%蔗糖+1%琼脂+0.3 mg/L IAA+1.0 mg/L KT+0.50 g/L活性炭，pH=5.2±0.02，得到欧洲越橘再生苗。本发明针对欧洲越橘，愈伤组织和不定芽的获得率分别为100%和95%以上。本方法从外植体到获得土壤栽培苗只需要2‑3个月时间，也为欧洲越橘的无性系繁殖提供了技术支持。

公开(公告)号：CN115873897A

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202211207981.8

申请日：2022-09-30

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 崔富强 ,  宋艳平

IPC: C12N15/84 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/36 ,  C12N5/00 ,  C12N5/04 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的欧洲越橘转基因体系的建立方法，该方法包括：取欧洲越橘茎叶作为外植体，诱导其长出一层薄薄的愈伤组织；将该带有一层薄薄愈伤组织的外植体材料放入加有生长素IBA、细胞分裂素ZT和乙酰丁香酮的农杆菌侵染液中进行侵染培养，侵染培养过程中对材料进行超声破碎和真空渗透等处理，促进农杆菌质粒进入植物材料；然后将侵染后的外植体材料进行共培养后再将转基因材料移至筛选培养基中进行筛选，最终获得表现出报告基因(甜菜素合成基因)所呈现的洋红色(玫红色)欧洲越橘愈伤组织。本发明采用特定的愈伤诱导培养基、农杆菌侵染处理、共培养培养基、共培养时间、抗性愈伤组织筛选培养基等进行根癌农杆菌介导的欧洲越橘愈伤组织转基因体系的构建，得到了转基因成功的玫红色愈伤组织，并且转化率也提高至4％。