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公开(公告)号：CN103820467B
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201410055967.X
申请日：2014-02-19
Applicant: 河南科技大学
Abstract: 一种牡丹SINE类反转录转座子序列的分离方法，先分离出牡丹SINE类反转录转座子的部分序列，根据其序列设计引物；以所设计引物进行PCR反应，得到生物素标记的探针；提取牡丹基因组后进行酶切，得到基因组酶切片段；同时将两条寡聚核苷酸链退火，形成双链的寡聚核苷酸接头，之后将酶切后的基因组片段与接头连接，并以单引物的PCR扩增，进行基因组片段库的富集；将生物素标记的探针与所得基因组片段杂交，筛选出目的片段；所得目的片段进行接头PCR，将反应产物进行克隆及阳性菌筛选以后，测序，进行序列分析，得到牡丹SINE类反转录转座子序列。本发明提供的分离牡丹SINE类反转录转座子序列的方法，为开发基于牡丹SINE类反转录转座子的分子标记提供基础。
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公开(公告)号：CN103820546B
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201410055992.8
申请日：2014-02-19
Applicant: 河南科技大学
Abstract: 一种牡丹基因组DNA分子标记方法，提取牡丹基因组DNA进行酶切，将酶切产物和接头DNA连接；将连接产物与预扩增引物进行PCR扩增，得到预扩增产物；取所得到预扩增产物与用内切酶接头选择性扩增引物iPBS引物进行PCR扩增，得PCR选择性扩增产物；然后取PCR选择性扩增产物，加入染色液并点样进行电泳，电泳完成后，银染，观察、拍照，分析结果。本发明是建立在PCR与酶切基础上的分子标记技术，操作简单；成本低，适用性强；针对牡丹基因组研究技术而设计，开发了一种新的基于反转录转座子的分子标记体系，为牡丹的种质资源遗传变异和进化研究提供新的技术手段。
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公开(公告)号：CN103820546A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410055992.8
申请日：2014-02-19
Applicant: 河南科技大学
CPC classification number: C12Q1/6855 , C12Q1/686 , C12Q2525/191 , C12Q2531/113
Abstract: 一种牡丹基因组DNA分子标记方法，提取牡丹基因组DNA进行酶切，将酶切产物和接头DNA连接；将连接产物与预扩增引物进行PCR扩增，得到预扩增产物；取所得到预扩增产物与用内切酶接头选择性扩增引物iPBS引物进行PCR扩增，得PCR选择性扩增产物；然后取PCR选择性扩增产物，加入染色液并点样进行电泳，电泳完成后，银染，观察、拍照，分析结果。本发明是建立在PCR与酶切基础上的分子标记技术，操作简单；成本低，适用性强；针对牡丹基因组研究技术而设计，开发了一种新的基于反转录转座子的分子标记体系，为牡丹的种质资源遗传变异和进化研究提供新的技术手段。
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公开(公告)号：CN103820467A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410055967.X
申请日：2014-02-19
Applicant: 河南科技大学
Abstract: 一种牡丹SINE类反转录转座子序列的分离方法，先分离出牡丹SINE类反转录转座子的部分序列，根据其序列设计引物；以所设计引物进行PCR反应，得到生物素标记的探针；提取牡丹基因组后进行酶切，得到基因组酶切片段；同时将两条寡聚核苷酸链退火，形成双链的寡聚核苷酸接头，之后将酶切后的基因组片段与接头连接，并以单引物的PCR扩增，进行基因组片段库的富集；将生物素标记的探针与所得基因组片段杂交，筛选出目的片段；所得目的片段进行接头PCR，将反应产物进行克隆及阳性菌筛选以后，测序，进行序列分析，得到牡丹SINE类反转录转座子序列。本发明提供的分离牡丹SINE类反转录转座子序列的方法，为开发基于牡丹SINE类反转录转座子的分子标记提供基础。
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