无荧光染料标记外泌体及其制备方法

    公开(公告)号:CN110423777A

    公开(公告)日:2019-11-08

    申请号:CN201910665088.1

    申请日:2019-07-23

    Abstract: 本发明公开了一种无荧光染料标记外泌体的制备方法,包括,步骤1:构建融合表达绿色荧光蛋白EGFP和外泌体标记蛋白LAMP的重组质粒;步骤2:将重组质粒和转染试剂按比例混合后,转染HEK293细胞,筛选获得稳定表达EGFP标记外泌体的HEK293细胞株;步骤3:从成功标记转染的HEK293细胞株中分离提取含有EGFP标记的外泌体。本发明利用基因工程化的HEK293细胞株,从其培养的上清液中提取含EGFP标记的外泌体,方法简便且外泌体不含荧光染料,利用外泌体的独特功能和EGFP在体内体外示踪的优越性,可避免常规荧光染料标记外泌体因染料扩散干扰荧光观察的弊端,为研究细胞间物质转移机制提供有力工具。

    高GC含量或以复杂结构DNA为模板的DNA片段的重叠延伸PCR法

    公开(公告)号:CN103820430A

    公开(公告)日:2014-05-28

    申请号:CN201410045588.2

    申请日:2014-02-08

    Abstract: 高GC含量或以复杂结构DNA为模板的DNA片段的重叠延伸PCR法,根据所需融合的两个DNA小片段设计引物,两个相邻DNA小片段的两对引物的末端设计一个重叠区段;采用所设计的引物,以所需融合的全长基因为模板,分别进行平行的PCR,PCR设置为5-8个循环,得到两组PCR产物所得PCR产物进行等摩尔混合后作为模板,然后加入所需融合的全长基因的一对外侧引物,进行第二轮PCR反应,得到所需融合的目的基因。本发明为高GC含量DNA片段或以复杂结构DNA片段为模板的DNA片段重叠延伸PCR扩增,提供了有效的方法,解决了扩增中出现弥散带、非特异性条带、易发生突变的问题;具有耗时短、循环数少、操作简单的特点。

    基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用

    公开(公告)号:CN110448696B

    公开(公告)日:2022-08-23

    申请号:CN201910816594.6

    申请日:2019-08-30

    Abstract: 本发明公开了一种基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法,包括以下的步骤:S1:培养盐藻,并从所述盐藻中提取盐藻外泌体;S2:将S1中得到的盐藻外泌体与靶向多肽通过化学偶联方法反应,得到靶向多肽偶联的盐藻外泌体;S3:将S2所得靶向多肽偶联的盐藻外泌体与药物通过电击法反应,生成基于盐藻外泌体靶向药物的递送载体。还公开了该制备方法制备的复合盐藻外泌体,以及复合盐藻外泌体的应用。本发明的制备方法以盐藻为来源获取的外泌体,来源丰富,操作简便,并且制备的递送载体可以精准靶向目的部位以及发挥基因和化学药物的治疗作用,为之后的临床应用研究提供了可靠的实验研究数据以及理论基础。

    一种具有抑制HIV‑1作用的融合基因betaTrCP‑CypA及其构建方法

    公开(公告)号:CN106967739A

    公开(公告)日:2017-07-21

    申请号:CN201710055996.X

    申请日:2017-01-25

    Abstract: 一种具有抑制HIV‑1作用的融合基因betaTrCP‑CypA及其构建方法;所述融合基因betaTrCP‑CypA,能抑制HIV‑1病毒,其基因序列如SEQ ID NO:1所示。该基因的构建方法,包括以下步骤:人工合成得到优化后的betaTrCP基因N端DNA;以betaTrCP基因N端DNA序列为模板,以B1和B2为引物扩增betaTrCP基因N端DNA片段;以CypAcDNA质粒为模版,以B3和B4为引物扩增CypA部分,得到CypA DNA片段;分别取1 µLbetaTrCP基因N端部分PCR产物片段和1 µL CypA DNA的PCR产物片段作为模板,以B1和B4为引物PCR扩增融合基因betaTrCP‑CypA,中间含5个丝甘氨酸的DNA,扩增出目的条带,克隆入合适的表达载体表达。本发明构建的融合基因betaTrCP‑CypA具有能够降解HIV‑1Gag,从而达到抑制HIV‑1的作用。

    一种Vc介导肿瘤靶向活性氧自生成纳米载体、制备及其应用

    公开(公告)号:CN108114281A

    公开(公告)日:2018-06-05

    申请号:CN201810127816.9

    申请日:2018-02-08

    Abstract: 本发明涉及一种Vc介导肿瘤靶向活性氧自生成纳米载体、制备及其应用,属于纳米生物材料领域,其是利用温敏化学物质将Vc或Vc的类似物/衍生物封装在中空磁性纳米颗粒的空腔中制得,方法简单,载体性价比高、易规模化、生物相容性好,能避免常规的光动力活性氧疗法组织穿透性差的缺点,制备成药物可应用于肿瘤的活性氧治疗,在磁导向作用下将纳米载体靶向送至肿瘤部位,并在高频交变磁场的作用下使载体产热,Vc或Vc的类似物/衍生物定向释放在肿瘤细胞中,利用其产生的高浓度过氧化氢杀伤肿瘤,同时利用光声成像系统检测肿瘤部位的活性氧含量变化,即可实现治疗过程的可视化,为肿瘤临床治疗提供一种新技术。

    一种用于电催化氧化尿素的镍基催化电极的制备方法

    公开(公告)号:CN104746096A

    公开(公告)日:2015-07-01

    申请号:CN201510089620.1

    申请日:2015-02-27

    Abstract: 本发明涉及一种用于电催化氧化尿素的镍基催化电极的制备方法,将泡沫镍放入盐酸溶液中,超声清洗,去除表面的氧化层和杂质;分别在乙醇和去离子水中进行超声振荡处理,去除其表面多余的盐酸;将镍盐、氟盐和尿素溶解于水中,搅拌,得到混合溶液;将清洗后的泡沫镍放入上述混合溶液中,在90-180℃进行水热反应3-24h;冷却至室温,取出泡沫镍,然后超声洗涤,干燥,300-400℃煅烧,即得泡沫镍负载多孔氧化镍纳米片电极。本发明的方法简单、成本低,制备得到的多孔NiO纳米片电极电化学性能稳定,具有良好的电化学催化氧化尿素的性能。

Patent Agency Ranking