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公开(公告)号：CN115960866B
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202310014122.5
申请日：2023-01-05
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12Q1/6895 , C12Q1/6816 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于基因编辑领域，涉及Cas12a蛋白，特别是指一种Mb2Cas12a‑RRVRR突变体蛋白及其制备方法和应用。本研究首次对16种Cas12a蛋白进行了评价，特别是它们在较低温度下的切割活性进行了评估。发现来自Moraxella bovoculi 57922菌株的Mb2Cas12a蛋白活性比其他蛋白更强。此外，本申请在Mb2Cas12a蛋白中引入了5个突变，从而创制Mb2Cas12a‑RRVRR变体蛋白，它具有更广泛的PAMs范围和更强的活性。综上所述，基于CRISPR/Mb2Cas12a‑RRVRR变体的新型检测工具增强了CRISPR技术的诊断能力，有潜力取代现有的Cas12a蛋白。
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公开(公告)号：CN114107526B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202111440174.6
申请日：2021-11-30
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于病原微生物的快速检测领域，特别是指一种检测西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的RPA引物对和crRNA及其试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，crRNA靶标序列如SEQ ID No.3所示。本发明将采用Crispr/LbCas12a核酸检测平台，针对西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的基因组设计特异性检测位点，并结合荧光可视化技术，开发出适合检测此类病原菌的简易性诊断方法。同时结合RPA等温扩增技术，进一步提高灵敏度。
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公开(公告)号：CN110567951B
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN201910886954.X
申请日：2019-09-19
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/70
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及基于CRISPR‑Cas12a技术的苹果茎沟病毒可视化检测体系及其检测方法。根据ASGV保守序列设计出crRNA，并制作用于比色检测的AuNP‑DNA，探究Cas12a蛋白体外切割反应时间和linker DNA浓度对检测效果的影响，建立最佳ASGV可视化检测体系及检测方法，该方法为恒温反应条件，并通过CRISPR‑Cas12a‑crRNA复合体识别病毒来提高特异性，且linker DNA具有通用性，不需要昂贵的双标记探针，借助低速离心可在40 min内检测多个样本，其检测下限为5.62×102copies/反应，灵敏度比RT‑PCR高100倍。
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公开(公告)号：CN115960866A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310014122.5
申请日：2023-01-05
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12Q1/6895 , C12Q1/6816 , C12R1/19
Abstract: 本发明属于基因编辑领域，涉及Cas12a蛋白，特别是指一种Mb2Cas12a‑RRVRR突变体蛋白及其制备方法和应用。本研究首次对16种Cas12a蛋白进行了评价，特别是它们在较低温度下的切割活性进行了评估。发现来自Moraxella bovoculi 57922菌株的Mb2Cas12a蛋白活性比其他蛋白更强。此外，本申请在Mb2Cas12a蛋白中引入了5个突变，从而创制Mb2Cas12a‑RRVRR变体蛋白，它具有更广泛的PAMs范围和更强的活性。综上所述，基于CRISPR/Mb2Cas12a‑RRVRR变体的新型检测工具增强了CRISPR技术的诊断能力，有潜力取代现有的Cas12a蛋白。
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公开(公告)号：CN109042319B
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN201810805048.8
申请日：2018-07-20
Applicant: 河南农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种防止苹果组培褐化和不定芽诱导的方法。该组合培养基包括初代组织培养基和不定芽诱导培养基。苹果组培方法包括：选择外植体、并进行预处理，初代诱导培养，诱导形成不定芽等步骤。本申请针对现有苹果组培中褐化严重的问题，分别通过对外植体取材、外植体前处理、消毒时间、培养基成分、激素配比等多个途径进行技术方案的优化探索，最终有效防止了酚类物质氧化，较好预防了苹果褐化现象的发生，统计表明，可将褐化率降低到25%以下，解决了苹果组培褐化率高的难题，表现出较好的技术优势，也为提高苹果快速繁殖效率奠定了较好技术基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110567951A
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201910886954.X
申请日：2019-09-19
Applicant: 河南农业大学
IPC: G01N21/78 , C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q1/6809 , C12Q1/6811
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，涉及基于CRISPR-Cas12a技术的苹果茎沟病毒可视化检测体系及其检测方法。根据ASGV保守序列设计出crRNA，并制作用于比色检测的AuNP-DNA，探究Cas12a蛋白体外切割反应时间和linker DNA浓度对检测效果的影响，建立最佳ASGV可视化检测体系及检测方法，该方法为恒温反应条件，并通过CRISPR-Cas12a-crRNA复合体识别病毒来提高特异性，且linker DNA具有通用性，不需要昂贵的双标记探针，借助低速离心可在40 min内检测多个样本，其检测下限为5.62×102copies/反应，灵敏度比RT-PCR高100倍。
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公开(公告)号：CN110241266A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910700918.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及病毒的快速检测领域，特别是指一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示。所述试剂盒的反应体系包括25μL预混液Buffer A、10μL预混液Buffer B、7.5μL引物及探针预混液Buffer C和2.5μL 10μM醋酸镁。与RT-PCR、RPA检测方法相比本申请的RPA-LFD的灵敏度最高为0.3fg·μL-1，比RT-PCR高1000倍，比RPA（琼脂糖凝胶电泳）灵敏度高10倍，三种方法检出率一致性较高，结果可靠。
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公开(公告)号：CN117721144A
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202311763499.7
申请日：2023-12-20
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了苹果MdAP2‑like基因在同时调控果实软化和果实大小中的应用，本发明分析了MdAP2‑like基因在乙烯、1‑MCP处理的苹果果实采后贮藏过程中的表达模式，并利用番茄转基因技术验证MdAP2‑like基因在调控果实软化中的作用，发现过表达MdAP2‑like基因的番茄果实与野生型相比，乙烯释放显著升高，果实硬度显著降低，果实提前着色和成熟软化，同时过表达MdAP2‑like基因使番茄果实的果个变小。说明该基因可以同时调控果实的成熟软化和果实大小，对培育耐贮运的大果型苹果新品种具有重要的理论指导意义。
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公开(公告)号：CN114395022B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202210105876.7
申请日：2022-01-27
Applicant: 河南农业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , A01H5/08 , A01H6/74
Abstract: 本发明公开了一种苹果锌指蛋白转录因子MdZF‑HD11及在调控果实成熟软化中的应用，分析了该基因在不同处理苹果果实采后贮藏过程中的表达模式，利用瞬时过表达和VIGS技术验证MdZF‑HD11基因在苹果果实后熟软化中的作用，发现过表达MdZF‑HD11基因的苹果果实与对照果实相比，乙烯释放显著升高，硬度显著降低，果实颜色明显变黄；而沉默MdZF‑HD11基因的苹果果实乙烯释放显著降低，果实颜色偏青。说明该基因可以调控苹果果实后熟软化，对培育耐贮运的苹果新品种具有积极的指导作用。
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公开(公告)号：CN110241266B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201910700918.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及病毒的快速检测领域，特别是指一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，探针序列如SEQ ID NO.3所示。所述试剂盒的反应体系包括25μL预混液Buffer A、10μL预混液Buffer B、7.5μL引物及探针预混液Buffer C和2.5μL 10μM醋酸镁。与RT‑PCR、RPA检测方法相比本申请的RPA‑LFD的灵敏度最高为0.3fg·μL‑1，比RT‑PCR高1000倍，比RPA（琼脂糖凝胶电泳）灵敏度高10倍，三种方法检出率一致性较高，结果可靠。
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