公开(公告)号：CN112176040A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202011002396.5

申请日：2020-09-22

Applicant: 江苏省海洋资源开发研究院(连云港) ,  江苏愚公生命科技有限公司

Inventor： 卢辰 ,  罗志丹 ,  陈晓雨 ,  张坤晓 ,  许恒皓 ,  唐雨婷 ,  陈佳玥

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/48 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开一种快速测定DNA聚合酶活性的方法，包括：(1)绘制标准曲线并计算线性回归方程：将两种寡核苷酸探针H1和H2以不同比例混合，测量荧光值并绘制标准曲线，计算线性回归方程；(2)恒温条件下进行DNA聚合酶活性检测反应：以步骤(1)中仅含H1的工作溶液为底物，加入dNTP混合液和镁离子，使用该DNA聚合酶对应的反应缓冲液，配制DNA聚合酶活性检测反应体系；(3)中止反应后测定产物荧光值：恒温反应后强行中止反应，降温到室温后测定产物含量，记录30min下的荧光增加值；(4)计算酶活性：将荧光增加值代入步骤(1)中得到的标准曲线对应的线性回归方程，得出体系中产物的含量，计算原酶液活性。不依赖同位素，操作简单，准确度和重复性好。

公开(公告)号：CN119082359A

公开(公告)日：2024-12-06

申请号：CN202411450960.8

申请日：2024-10-17

Applicant: 江苏省海洋资源开发研究院(连云港)

Inventor： 罗志丹 ,  田亚茹 ,  卢辰 ,  陈佳玥 ,  张丹 ,  英新宇 ,  张普娟

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/77

Abstract: 本发明公开了一种用于检测尖孢镰刀菌DNA的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括引物组、Bst DNA聚合酶、dNTP、Cas12b核酸酶、sgRNA、MgSO4、反应缓冲液、牛磺酸、携带荧光报告基团的单链寡核苷酸探针。所述特异性引物组的核酸序列如SEQ IDNo.1‑5或SEQ ID No.6‑11所示，所述sgRNA的核酸序列如SEQ ID No.12‑14所示。本发明建立并优化了针对该尖孢镰刀菌的CRISPR/Cas12b检测体系。该检测方法特异性强，灵敏度高，操作简便快捷，能在30分钟内完成检测，更适合基层推广和应用。