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公开(公告)号：CN102086450A
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN201010556585.7
申请日：2011-03-31
Applicant: 江苏大学
IPC: C12N9/12
Abstract: 本发明提供一种免疫亲和层析柱，以及应用该层析柱分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的方法。所说的免疫亲和层析柱是将抗p125的多克隆抗体与CarboLinkTMCouplingGel耦联而制得。其分离纯化方法是：应用杆状病毒Bac-to-Bac系统，从感染了含各亚基重组病毒的宿主昆虫细胞Sf-9中，应用所制备的免疫亲和层析柱，结合离子交换层析，分离纯化出高纯度的目的产物。本发明可以简单、快速、高效地从杆状病毒表达系统中分离纯化出具高生物活性的重组人DNA聚合酶δ多亚基蛋白复合物；将极大地推动某些重要疾病、特别是癌症疾病研究所涉及到的DNA聚合酶分离纯化研究领域的发展。
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公开(公告)号：CN102086450B
公开(公告)日：2013-01-23
申请号：CN201010556585.7
申请日：2011-03-31
Applicant: 江苏大学
IPC: C12N9/12
Abstract: 本发明提供一种免疫亲和层析柱，以及应用该层析柱分离纯化高酶活人类DNA聚合酶δ的方法。所说的免疫亲和层析柱是将抗p125的多克隆抗体与CarboLinkTMCouplingGel耦联而制得。其分离纯化方法是：应用杆状病毒Bac-to-Bac系统，从感染了含各亚基重组病毒的宿主昆虫细胞Sf-9中，应用所制备的免疫亲和层析柱，结合离子交换层析，分离纯化出高纯度的目的产物。本发明可以简单、快速、高效地从杆状病毒表达系统中分离纯化出具高生物活性的重组人DNA聚合酶δ多亚基蛋白复合物；将极大地推动某些重要疾病、特别是癌症疾病研究所涉及到的DNA聚合酶分离纯化研究领域的发展。
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公开(公告)号：CN102031263B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010556599.9
申请日：2010-11-24
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉用应用家蚕生物反应器制备人DNA聚合酶δ的方法。具体是将人DNA聚合酶δ的4个亚基分别构建到供体质粒上；在经过改造的大肠杆菌DH10Bac/BmNPV中和家蚕BmNPV杆状病毒DNA中Tn7转座子上发生转座，筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕BmN细胞中制备该4种亚基不同装配组合的重组病毒；感染宿主家蚕，在家蚕体内进行多亚基蛋白复合物的表达和装配；收集感染后的幼虫体液或整体匀浆，经分离纯化后获得目的产物。通过本发明可以高效、低成本、大规模地制备高比活、正确装配的DNA聚合酶多亚基蛋白复合物；能够被广泛地应用于某些重要疾病、特别是癌症疾病研究领域涉及DNA复制和损伤修复之基础研究。
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公开(公告)号：CN102031263A
公开(公告)日：2011-04-27
申请号：CN201010556599.9
申请日：2010-11-24
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉用应用家蚕生物反应器制备人DNA聚合酶δ的方法。具体是将人DNA聚合酶δ的4个亚基分别构建到供体质粒上；在经过改造的大肠杆菌DH10Bac/BmNPV中和家蚕BmNPV杆状病毒DNA中Tn7转座子上发生转座，筛选出带有正确亚基的克隆，随后在家蚕BmN细胞中制备该4种亚基不同装配组合的重组病毒；感染宿主家蚕，在家蚕体内进行多亚基蛋白复合物的表达和装配；收集感染后的幼虫体液或整体匀浆，经分离纯化后获得目的产物。通过本发明可以高效、低成本、大规模地制备高比活、正确装配的DNA聚合酶多亚基蛋白复合物；能够被广泛地应用于某些重要疾病、特别是癌症疾病研究领域涉及DNA复制和损伤修复之基础研究。
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