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公开(公告)号：CN103160482A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201310080459.2
申请日：2013-03-14
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法，步骤如下：在室温下收集鸡蛋清，并调节pH至5.5左右，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入分子量介于200-20000的聚乙二醇，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入饱和硫酸铵溶液，混匀后离心；分别收集离心得到的上层清液和下层清液；对上层清液进行超滤或者透析处理可以得到高纯度的鸡蛋清溶菌酶；对下层清液进行超滤或者透析处理可以得到卵白蛋白与卵转铁蛋白为主的较高纯度的其它活性蛋白。本发明简单易行，成本低廉，条件温和，可以很好地保持溶菌酶品质，适用于大规模工业化生产，同时还可以得到其它活性蛋白，进一步提高生产效益。
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公开(公告)号：CN101475954B
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN200810243646.7
申请日：2008-12-05
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌芽孢表面展示具有催化活性的脂肪酶的重组芽孢制备方法。该方法是利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与具有三酰甘油脂水解和转酯功能的脂肪酶基因重组后，构建融合表达的整合性重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示脂肪酶的重组芽孢。与本领域已知的方法相比，本发明方法将不同来源的具有三酰甘油脂水解功能的脂肪酶展示于Bacillus subtilis芽孢的表面，利用芽孢所具有的独特抗逆性，能提高脂肪酶的催化活性和稳定性。
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公开(公告)号：CN101693900A
公开(公告)日：2010-04-14
申请号：CN200910232920.5
申请日：2009-10-09
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotX的应用，具体是枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotX作为芽孢表面展示外源蛋白的一种蛋白载体，通过芽孢表面展示技术构建表面展示外源蛋白的重组芽孢。以该载体蛋白的编码基因cotX，与外源蛋白基因的编码序列进行基因重组，构建融合表达重组蛋白的整合性重组质粒，转化枯草芽孢杆菌后筛选重组菌株，诱导重组菌株产生芽孢，得到表面展示外源目的蛋白的重组芽孢。
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公开(公告)号：CN101671691B
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN200910232918.8
申请日：2009-10-09
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及基因工程领域。具体涉及一种促进微生物和植物生长的基因以及含有该基因具有加速生长的转化体及其进一步涉及培育生长周期短的转基因油菜。所说的促进微生物和植物生长的基因具有SEQ.ID.No.1所示核苷酸序列。通过构建该基因的表达载体，将其转入微生物或植物中，能有效促进微生物和植物的生长。
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公开(公告)号：CN102174557A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201110063273.7
申请日：2011-03-16
Applicant: 江苏大学
CPC classification number: C12N15/75 , C07K14/32 , C12N9/0006
Abstract: 将家蚕乙醇脱氢酶作为外源蛋白展示在枯草芽孢杆菌表面，属于重组融合蛋白技术领域。本发明以枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因cotC为分子载体，与家蚕乙醇脱氢酶基因Bmadh重组，构建出融合表达家蚕乙醇脱氢酶BmADH的整合型重组质粒。以之转化枯草芽孢杆菌，通过同源重组使外源基因整合于染色体上特定位点的淀粉酶基因amyE中，使淀粉酶基因被破坏而导致重组菌株无淀粉酶活性，以此成功地筛选出含有融合表达CotC-BmADH的重组枯草芽孢杆菌菌株。通过诱导表达该重组菌株得到表面展示有家蚕乙醇脱氢酶融合蛋白的芽孢。本发明使原本对温度和pH不稳定的乙醇脱氢酶成为可在不同环境条件下具有相对稳定活性的乙醇脱氢酶融合蛋白，所产生的重组芽孢可用于动物直接口服。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101418310A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810243647.1
申请日：2008-12-05
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及表面展示外源蛋白的重组芽孢的制备方法，特别是枯草芽孢杆菌芽孢表面展示对虾白斑综合征病毒Vp28蛋白的重组芽孢。该方法利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与对虾白斑综合征病毒表面抗原蛋白基因重组，构建融合表达的整合性重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到枯草芽孢杆菌重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示对虾白斑综合征病毒蛋白的重组芽孢。
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公开(公告)号：CN103160482B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310080459.2
申请日：2013-03-14
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种共分离制备鸡蛋清溶菌酶与活性蛋白的方法，步骤如下：在室温下收集鸡蛋清，并调节pH至5.5左右，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入分子量介于200-20000的聚乙二醇，搅拌均匀后离心；向离心后得到的上清液中加入饱和硫酸铵溶液，混匀后离心；分别收集离心得到的上层清液和下层清液；对上层清液进行超滤或者透析处理可以得到高纯度的鸡蛋清溶菌酶；对下层清液进行超滤或者透析处理可以得到卵白蛋白与卵转铁蛋白为主的较高纯度的其它活性蛋白。本发明简单易行，成本低廉，条件温和，可以很好地保持溶菌酶品质，适用于大规模工业化生产，同时还可以得到其它活性蛋白，进一步提高生产效益。
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公开(公告)号：CN101475954A
公开(公告)日：2009-07-08
申请号：CN200810243646.7
申请日：2008-12-05
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌芽孢表面展示具有催化活性的脂肪酶的重组芽孢制备方法。该方法是利用枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白基因为分子载体，与具有三酰甘油脂水解和转酯功能的脂肪酶基因重组后，构建融合表达的整合性重组质粒，并转化枯草芽孢杆菌得到重组菌株，诱导重组菌株产生的芽孢表面展示脂肪酶的重组芽孢。与本领域已知的方法相比，本发明方法将不同来源的具有三酰甘油脂水解功能的脂肪酶展示于Bacillus subtilis芽孢的表面，利用芽孢所具有的独特抗逆性，能提高脂肪酶的催化活性和稳定性。
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公开(公告)号：CN103667064B
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201310429369.X
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用10～50mM EDTA溶液于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用高渗缓冲液与低渗缓冲液重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到99.2%以上。本发明细胞破碎工艺操作简便，设备要求低，易于放大生产，对大肠杆菌破碎率高，并且同时得到细胞内可溶性及不溶性成分。
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公开(公告)号：CN103667064A
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310429369.X
申请日：2013-09-22
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明公开了一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用10～50mMEDTA溶液于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用高渗缓冲液与低渗缓冲液重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到99.2%以上。本发明细胞破碎工艺操作简便，设备要求低，易于放大生产，对大肠杆菌破碎率高，并且同时得到细胞内可溶性及不溶性成分。
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