公开(公告)号：CN118995768A

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202411107817.9

申请日：2024-08-13

Applicant: 江苏大学

Inventor： 陈秀敏 ,  孙钰

IPC: C12N15/60 ,  C12N9/88 ,  C12N15/10 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于基因工程及分子生物学领域，具体涉及一种咖啡树谷氨酸脱羧酶基因克隆和原核表达方法以及GABA制备方法。本发明首先获得Cagad，序列如SEQ ID NO.1所示；然后进行平末端加A处理，得到T克隆载体连接体系，转化至E.coli TOP10中，获得的重组T克隆载体细菌；并设计带有酶切位点的引物克隆Cagad，构建重组载体，导入至大肠杆菌感受态细菌中，获得表达CaGAD的重组菌株；最后利用IPTG对重组菌株进行诱导表达，并通过镍柱亲和层析法进行纯化，得到纯化蛋白，进而制备获得GABA。本发明实现了CaGAD重组蛋白的体外可溶性表达，在食品和医药等领域具有良好的应用前景。