公开(公告)号：CN107267433B

公开(公告)日：2020-05-22

申请号：CN201710580770.1

申请日：2017-07-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  史劲松 ,  龚劲松 ,  张强 ,  李恒 ,  蒋敏 ,  顾炳琛

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种腈水解酶组成型表达体系的构建及其在烟酸合成中的应用，属于工业生物技术领域。所述的腈水解酶组成型表达载体是通过在pET‑3b质粒导入恶臭假单胞菌Pseudomonas putida腈水解酶基因编码序列构建而成，得到重组质粒pET‑3b‑NIT，转化至E.coli BL21(DE3)中得到无需进行体外诱导的组成型重组腈水解酶表达菌株，命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli NIT‑1，现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.14254。进一步采用pH‑stat补料策略进行精确调控以提升菌体密度和腈水解酶产量，并以大肠埃希氏菌游离细胞为催化剂，以3‑氰基吡啶为底物，通过批次投料的方式进行连续转化生产烟酸。本发明提供了一种新的无需体外诱导的组成型重组腈水解酶产生菌，该重组菌可高效表达腈水解酶，生产成本低，周期短，发酵过程无需添加诱导剂，最终获得的菌体密度大，可有效催化3‑氰基吡啶生产烟酸，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN107267433A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710580770.1

申请日：2017-07-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  史劲松 ,  龚劲松 ,  张强 ,  李恒 ,  蒋敏 ,  顾炳琛

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种腈水解酶组成型表达体系的构建及其在烟酸合成中的应用，属于工业生物技术领域。所述的腈水解酶组成型表达载体是通过在pET-3b质粒导入恶臭假单胞菌Pseudomonas putida腈水解酶基因编码序列构建而成，得到重组质粒pET-3b-NIT，转化至E.coli BL21(DE3)中得到无需进行体外诱导的组成型重组腈水解酶表达菌株，命名为大肠埃希氏菌Escherichia coli NIT-1，现保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.14254。进一步采用pH-stat补料策略进行精确调控以提升菌体密度和腈水解酶产量，并以大肠埃希氏菌游离细胞为催化剂，以3-氰基吡啶为底物，通过批次投料的方式进行连续转化生产烟酸。本发明提供了一种新的无需体外诱导的组成型重组腈水解酶产生菌，该重组菌可高效表达腈水解酶，生产成本低，周期短，发酵过程无需添加诱导剂，最终获得的菌体密度大，可有效催化3-氰基吡啶生产烟酸，具有广阔的应用前景。