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公开(公告)号：CN102676480B
公开(公告)日：2013-02-27
申请号：CN201210187066.7
申请日：2012-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种应用自诱导培养基和双温度调控策略生产胞外普鲁兰酶的方法，属于微生物发酵生产普鲁兰酶的技术领域。本发明将黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）CCTCC M2012108普鲁兰酶编码基因插入表达载体pET28a(+)中构建重组质粒，并转化大肠杆菌获得含有目的普鲁兰酶基因的重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET28a(+)-pulA。利用自诱导培养基，并采用先37℃培养2~4小时后25℃继续培养48~72小时的双温度调控方式，将重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a(+)-pulA进行培养和发酵产酶。采用优化后的自诱导培养基和双温度发酵条件后，胞外普鲁兰酶酶活可以达到60~70U/mL。本发明为重组大肠杆菌生产胞外普鲁兰酶提供了有效策略，对于今后开发新型重组普鲁兰酶的生产工艺和应用价值具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102676480A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201210187066.7
申请日：2012-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种应用自诱导培养基和双温度调控策略生产胞外普鲁兰酶的方法，属于微生物发酵生产普鲁兰酶的技术领域。本发明将黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）CCTCC NO：M2012108普鲁兰酶编码基因插入表达载体pET28a(+)中构建重组质粒，并转化大肠杆菌获得含有目的普鲁兰酶基因的重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET28a(+)-pulA。利用自诱导培养基，并采用先37℃培养2~4小时后25℃继续培养48~72小时的双温度调控方式，将重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a(+)-pulA进行培养和发酵产酶。采用优化后的自诱导培养基和双温度发酵条件后，胞外普鲁兰酶酶活可以达到60~70U/mL。本发明为重组大肠杆菌生产胞外普鲁兰酶提供了有效策略，对于今后开发新型重组普鲁兰酶的生产工艺和应用价值具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102676437A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201210187070.3
申请日：2012-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种产胞外普鲁兰酶的方法及其专用微生物，属于微生物发酵生产普鲁兰酶的技术领域。本发明筛选得到一株产胞外普鲁兰酶的新菌种，分类命名为黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）SHN-1，保藏编号CCTCC NO：M2012108。以该菌株作为出发菌种，经过发酵培养基和产酶培养条件的优化，最终获得的胞外普鲁兰酶酶活达到11U/mL。通过对黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）CCTCC NO：M2012108产胞外普鲁兰酶酶学性质的考察，确定了该普鲁兰酶的最适pH值为pH5.0、最适温度为55℃，其水解普鲁兰类型为I型普鲁兰酶。本发明有助于了解产胞外普鲁兰酶菌种的生物多样性，对于今后改善胞外普鲁兰酶的生产工艺、促进胞外普鲁兰酶的高效生产具有指导意义。
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公开(公告)号：CN102676437B
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210187070.3
申请日：2012-06-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种产胞外普鲁兰酶的方法及其专用微生物，属于微生物发酵生产普鲁兰酶的技术领域。本发明筛选得到一株产胞外普鲁兰酶的新菌种，分类命名为黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）SHN-1，保藏编号CCTCCNO：M2012108。以该菌株作为出发菌种，经过发酵培养基和产酶培养条件的优化，最终获得的胞外普鲁兰酶酶活达到11U/mL。通过对黑座克雷伯氏菌（Klebsiellavariicola）CCTCCNO：M2012108产胞外普鲁兰酶酶学性质的考察，确定了该普鲁兰酶的最适pH值为pH5.0、最适温度为55℃，其水解普鲁兰类型为I型普鲁兰酶。本发明有助于了解产胞外普鲁兰酶菌种的生物多样性，对于今后改善胞外普鲁兰酶的生产工艺、促进胞外普鲁兰酶的高效生产具有指导意义。
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