公开(公告)号：CN115772533A

公开(公告)日：2023-03-10

申请号：CN202211021222.2

申请日：2022-08-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘延峰 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  刘龙 ,  吕雪芹 ,  田荣臻 ,  赵润芝

IPC: C12N15/75 ,  C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明涉及一种细菌连续进化系统、正交易错DNA聚合酶及连续进化方法。本发明将正交DNA复制系统与正交易错DNA聚合酶结合后，获得了一种能够包含所有突变类型、可实现长DNA片段突变、连续性好和操作简便的连续进化方法。通过诱导DNA聚合酶表达的开启与关闭，实现线性质粒易错突变过程与高保真复制过程的切换，从而实现靶DNA序列的高效连续进化。

公开(公告)号：CN116004692A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202210909397.0

申请日：2022-07-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘延峰 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  刘龙 ,  李江华 ,  吕雪芹 ,  赵润芝 ,  田荣臻

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备方法及转化方法，属于基因工程技术领域。通过使用木糖诱导型启动子PxylA在基因组上过表达一个额外拷贝的comK基因获得一株转化效率提高的重组枯草芽孢杆菌，再通过对培养基种类、种子液培养时间、外源DNA添加用量、感受态中甘油添加量的优化，建立了一种高效、便捷的DNA转化方法。

公开(公告)号：CN115786335A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202210955743.9

申请日：2022-08-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘延峰 ,  陈坚 ,  赵润芝 ,  田荣臻 ,  堵国成 ,  刘龙 ,  李江华 ,  吕雪芹

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种适用于多种典型模式微生物的高强度启动子，本发明是以P43启动子为基础，通过随机突变和高通量筛选获得了7个高强度启动子序列(PM1～PM7)，并在多种典型模式微生物中使用质粒中进行游离表达，证明了其有效性和通用性。

公开(公告)号：CN115725486A

公开(公告)日：2023-03-03

申请号：CN202210994809.5

申请日：2022-08-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘延峰 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  刘龙 ,  吕雪芹 ,  田荣臻 ,  赵润芝

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C12N15/53 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N15/11 ,  A23L29/00 ,  A01N63/23 ,  A01P7/00 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种利用甲醇为碳源的苏云金芽孢杆菌及其应用，本发明通过在野生型苏云金芽孢杆菌中引入甲醇脱氢酶MdH、MdH激活蛋白AcT、3‑己酮糖‑6‑磷酸合酶HpS、6‑磷酸‑3‑己酮异构酶PhI和NADH脱氢酶NdH，首先实现了苏云金芽孢杆菌消耗0.71g/L甲醇，进一步，通过将Pveg启动子替换为突变后的Pveg启动子，将甲醇消耗量提升至11.7倍，达8.3g/L。

公开(公告)号：CN113832087B

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202010577670.5

申请日：2020-06-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 邓禹 ,  赵运英 ,  张祺玥 ,  付雯宣 ,  许铭清 ,  刘源 ,  赵润芝 ,  朱桐江

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用大肠杆菌全生物合成丙二酸的方法，属于生物工程领域。本发明是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，将大肠杆菌自身的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和天冬氨酸转氨酶共表达，将来自谷氨酸棒杆菌的天冬氨酸‑α‑脱氢酶基因单独进行表达，将大肠杆菌自身的琥珀酸半醛脱氢酶基因和来自铜绿假单胞菌的异源基因β‑丙氨酸丙酮酸转氨酶基因共表达，构建了经由草酰乙酸‑天冬氨酸的丙二酸全生物合成途径，使工程菌积累丙二酸的能力进一步提高，发酵36小时丙二酸产量可达0.74g/L，较前期构建菌株丙二酸最高产量0.23g/L提高了3倍，发酵时间提前了12小时。

公开(公告)号：CN115807268A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202210909416.X

申请日：2022-07-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘延峰 ,  陈坚 ,  赵润芝 ,  堵国成 ,  刘龙 ,  李江华 ,  吕雪芹 ,  田荣臻

IPC: C40B40/06 ,  C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明涉及一种苏云金芽孢杆菌启动子文库及其应用。本发明以苏云金芽孢杆菌为研究对象，以绿色荧光蛋白为报告基因，通过上述所选启动子驱动报告基因表达，根据菌株对数生长期及生长稳定期的转录组数据，筛选出不同表达强度的启动子构建启动子文库，丰富了该菌株的表达调控元件，促进了生物催化的发展。

公开(公告)号：CN113832087A

公开(公告)日：2021-12-24

申请号：CN202010577670.5

申请日：2020-06-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 邓禹 ,  赵运英 ,  张祺玥 ,  付雯宣 ,  许铭清 ,  刘源 ,  赵润芝 ,  朱桐江

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12P7/46 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用大肠杆菌全生物合成丙二酸的方法，属于生物工程领域。本发明是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，将大肠杆菌自身的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和天冬氨酸转氨酶共表达，将来自谷氨酸棒杆菌的天冬氨酸‑α‑脱氢酶基因单独进行表达，将大肠杆菌自身的琥珀酸半醛脱氢酶基因和来自铜绿假单胞菌的异源基因β‑丙氨酸丙酮酸转氨酶基因共表达，构建了经由草酰乙酸‑天冬氨酸的丙二酸全生物合成途径，使工程菌积累丙二酸的能力进一步提高，发酵36小时丙二酸产量可达0.74g/L，较前期构建菌株丙二酸最高产量0.23g/L提高了3倍，发酵时间提前了12小时。