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公开(公告)号：CN112899208A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN112899208B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN116463273A
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202310240468.7
申请日：2023-03-14
Applicant: 江苏香地化学有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了增强5’‑胞苷酸积累的方法及应用，属于基因工程和微生物工程领域。本发明通过敲除ppnN、ushA、yrfG、yjjG、umpH、umpG基因，过量表达5’‑CTP二磷酸水解酶基因nudG，乳清酸磷酸核糖转移酶基因pyrE，整合表达尿苷酸激酶突变体基因PyrH(R92G/D93G)，并进一步敲除胞苷脱氨酶基因cdd、核糖核苷三磷酸还原酶基因nrdD，整合表达尿苷‑胞苷激酶基因udk、磷酸核糖焦磷酸合成酶基因prs、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因zwf和6‑磷酸葡糖酸脱氢酶基因，提高大肠杆菌的5’‑胞苷酸积累能力。在不添加任何抗生素和诱导剂的条件下，重组菌在60L发酵罐中5’‑胞苷酸产量达到39.6g/L。
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公开(公告)号：CN113416662A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110621208.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上，并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径，还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中，进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法，将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中，使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L，在5L发酵罐发酵水平，西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113388536A
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202110621179.2
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了产西柏三烯一醇的酿酒酵母的构建方法及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过在酿酒酵母W303‑1A中异源表达西柏三烯一醇合成的2个关键酶香叶基香叶基焦磷酸合酶基因ggpps和西柏三烯醇合酶基因cbts，实现了西柏三烯一醇在酿酒酵母中的从头生产，并进一步通过与西柏三烯醇合酶基因cbts的串连过表达关键酶法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)，获得的重组菌株的西柏三烯一醇产量显著提高。将上述途径构建至酿酒酵母BY4741中，其西柏三烯一醇的产量提高至对照菌株的3倍。在关键酶法尼基焦磷酸合成酶基因前添加启动子，进一步提高重组酿酒酵母的西柏三烯一醇产量。
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公开(公告)号：CN113416662B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202110621208.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上，并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径，还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中，进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法，将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中，使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L，在5L发酵罐发酵水平，西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
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公开(公告)号：CN114107143B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202111280840.4
申请日：2021-11-01
Applicant: 江苏香地化学有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产5’‑胞苷酸的方法，属于基因工程和微生物工程领域。本发明通过基因敲除技术对大肠杆菌的胞苷单磷酸焦磷酸化酶基因ushA和核苷酸5'‑单磷酸核苷酶基因ppnN进行敲除，获得可高效积累5’‑胞苷酸（5’‑CMP）的大肠杆菌突变体。进一步通过过量表达尿苷激酶基因udk，获得高效生产5’‑CMP的重组大肠杆菌，5’‑CMP的发酵水平可达31.8 g/L以上。这种高效的大肠杆菌菌株可用于实现5’‑CMP的工业化生产，利于降低其生产成本及环境污染，实现绿色生物制造。
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公开(公告)号：CN114107143A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111280840.4
申请日：2021-11-01
Applicant: 江苏香地化学有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产5’‑胞苷酸的方法，属于基因工程和微生物工程领域。本发明通过基因敲除技术对大肠杆菌的胞苷单磷酸焦磷酸化酶基因ushA和核苷酸5'‑单磷酸核苷酶基因ppnN进行敲除，获得可高效积累5’‑胞苷酸（5’‑CMP）的大肠杆菌突变体。进一步通过过量表达尿苷激酶基因udk，获得高效生产5’‑CMP的重组大肠杆菌，5’‑CMP的发酵水平可达31.8 g/L以上。这种高效的大肠杆菌菌株可用于实现5’‑CMP的工业化生产，利于降低其生产成本及环境污染，实现绿色生物制造。
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公开(公告)号：CN112852699A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110170739.7
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种生产西柏三烯一醇的重组菌及其应用，本发明通过异源表达GGPP合酶基因ggpps和西柏三烯醇合酶基因cbts，构建了可生产植物来源的西柏三烯一醇的重组菌株。通过过表达DXP途径中碳代谢通量的关键基因1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸合成酶基因dxs和异戊二烯焦磷酸异构酶基因idi提高西柏三烯一醇产量。进一步优化表达质粒过量表达dxs和idi，西柏三烯一醇产量提高至对照的2.60倍。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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