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公开(公告)号：CN116064714A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202310056996.7
申请日：2023-01-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化生产熊去氧胆酸的方法及应用，属于基因工程与生物催化领域。本发明提供了基于辅因子循环再生的酶共表达“两步法”催化生产熊去氧胆酸和基于辅因子循环再生系统单独表达酶催化高效生产熊去氧胆酸，并通过优化反应条件，显著提高了催化反应的转化率，使催化鹅去氧胆酸生成熊去氧胆酸的转化率均达90％以上。采用本发明的方法可提高生产效率，在医药化学品等等领域中有巨大的应用前景。
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公开(公告)号：CN112899208B
公开(公告)日：2022-10-18
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN116694589A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202310663759.7
申请日：2023-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变，经筛选获得复合突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍，突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91％，具有工业化生产前景。
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公开(公告)号：CN116694589B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310663759.7
申请日：2023-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶的突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行单点突变、两两复合突变和三点复合突变，经筛选获得复合突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，提高7β‑HSDH的催化效率以及热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P、T189V/V207M/M144H、T189V/V207M/G146A、T189V/V207M/A158S、T189V/V207M/V183I。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.8倍，突变后的7β‑HSDH突变体在催化100g·L‑1的7‑酮基‑石胆酸转化率可达到91％，具有工业化生产前景。
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公开(公告)号：CN116445435A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310064553.2
申请日：2023-01-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/04 , C07K19/00 , C12N15/53 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P33/00 , C12P33/02 , C12P33/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种融合表达催化生产熊去氧胆酸的方法及应用，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明通过linker连接7β‑羟基类固醇脱氢酶和7α‑羟基类固醇脱氢酶两个基因，构建融合蛋白7α‑HSDH‑Linker‑7β‑HSDH，并将构建的融合蛋白用于熊去氧胆酸的催化生产工艺，为酶法催化生产熊去氧胆酸的工艺提供了一种新的选择方向，同时对其催化生产熊去氧胆酸的工艺进行了系统优化，显著提高了熊去氧胆酸的转化效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112899208A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110177960.5
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/90 , C12P7/02 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种提高重组菌西柏三烯一醇产量的方法，本发明通过系统调控西柏三烯一醇合成关键酶基因ggpps、cbts、dxs和idi的表达，在E.coli中实现植物来源的西柏三烯一醇的高产。进一步同时过量表达法尼基焦磷酸合成酶基因ispA及ggpps、cbts、dxs和idi基因，提高其西柏三烯一醇产量。基于发酵优化确定的最适葡萄糖与酵母粉添加方式及发酵周期，显著提高了西柏三烯一醇产量。本发明还提供了上述方法在制备含西柏三烯一醇的产品中的应用。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN113416662B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202110621208.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产西柏三烯一醇的酿酒酵母及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过将关键酶西柏三烯醇合成酶基因、香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)基因整合至酿酒酵母菌株基因组上，并利用启动子Phxt1替换角鲨烯合成酶(ERG9)原来的启动子来敲低竞争途径麦角固醇途径，还将含有关键酶基因ggpp基因和cbts基因的游离质粒转入该酿酒酵母中，进一步提高了西柏三烯一醇产量。本发明还采用线粒体区室化方法，将GGPP合酶和西柏三烯醇合成酶定位到线粒体中，使西柏三烯一醇产量提高至283.98μg/L，在5L发酵罐发酵水平，西柏三烯一醇产量可达15mg/L。
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公开(公告)号：CN116804189A
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202310066482.X
申请日：2023-01-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新7β‑羟基类固醇脱氢酶及应用，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明从数据库中挖掘出一种具有高转化率的7β‑羟基类固醇脱氢酶，并在大肠杆菌中实现了酶的异源表达。通过对酶学性质等参数进行测定比较，确定该酶在熊去氧胆酸生产方面具有较高的催化潜力。本发明将该7β‑羟基类固醇脱氢酶用于一锅法催化鹅去氧胆酸生产熊去氧胆酸，反应3h的转化率可达68.3％。
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公开(公告)号：CN112852699A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110170739.7
申请日：2021-02-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种生产西柏三烯一醇的重组菌及其应用，本发明通过异源表达GGPP合酶基因ggpps和西柏三烯醇合酶基因cbts，构建了可生产植物来源的西柏三烯一醇的重组菌株。通过过表达DXP途径中碳代谢通量的关键基因1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸合成酶基因dxs和异戊二烯焦磷酸异构酶基因idi提高西柏三烯一醇产量。进一步优化表达质粒过量表达dxs和idi，西柏三烯一醇产量提高至对照的2.60倍。采用本发明获得的西柏三烯一醇高产量菌株及方法可高效生产西柏三烯一醇，可促进其在农业及烟草等领域中的应用。
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公开(公告)号：CN118685377A
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202410963340.8
申请日：2024-07-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种7β‑羟基类固醇脱氢酶组合突变体及其应用。所述的7β‑HSDH突变体在SEQ ID NO.1所示的野生型上进行突变获得突变体T189V/V207M，在此基础上进一步筛选出25个氨基酸残基位点，通过定点饱和突变，筛选出提高7β‑HSDH的催化效率以及明显提高热稳定性的突变体T189V/V207M/V91P。本发明构建的突变后的7β‑HSDH突变体相较于出发7β‑HSDH酶活力提高了3.5倍，突变后的7β‑HSDH突变体在50℃下保温后残留酶活仍高达91.2％，具有工业化生产前景。
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