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公开(公告)号：CN106916819B
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201710290938.5
申请日：2017-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种活性提高的枯草芽孢杆菌启动子及其构建与应用，属于启动子工程领域。本发明方法以PsrfA启动子为模板进行定向进化，筛选得到了活性大幅提高的突变体启动子，以绿色荧光蛋白GFP为报告基因，突变后的启动子的最高表达量较原始启动子提高了70％。随后又进行了天冬氨酸酶AspA的表达，其突变体表达量较原始相比，分别提高了90％。此法与利用流式细胞仪建库相比，极大减少工作量而且有效，与此同时将此策略运用于其他启动子改造，改造后的启动子表达目的基因的能力也有很大提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107058316A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201611126601.2
申请日：2016-12-09
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌自诱导表达系统及其应用，属于启动子工程领域。本发明通过对启动子srfA的理性设计，将该启动子的核心区‑35区和‑10区突变为保守区，得到了一些比较强的启动子，以绿色荧光蛋白GFP为报告基因，突变后的启动子的最高表达量较原始启动子提高了150％。随后又进行了氨肽酶AP和纳豆激酶NK的表达，其突变体表达量较原始相比，分别提高了360％和50％。本发明方法与随机突变相比，极大减少工作量而且有效，与此同时将此策略运用于其他启动子改造，改造后的启动子表达目的基因的能力也有很大提高。
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公开(公告)号：CN114107309B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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公开(公告)号：CN106916819A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201710290938.5
申请日：2017-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种活性提高的枯草芽孢杆菌启动子及其构建与应用，属于启动子工程领域。本发明方法以PsrfA启动子为模板进行定向进化，筛选得到了活性大幅提高的突变体启动子，以绿色荧光蛋白GFP为报告基因，突变后的启动子的最高表达量较原始启动子提高了70％。随后又进行了天冬氨酸酶AspA的表达，其突变体表达量较原始相比，分别提高了90％。此法与利用流式细胞仪建库相比，极大减少工作量而且有效，与此同时将此策略运用于其他启动子改造，改造后的启动子表达目的基因的能力也有很大提高。
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公开(公告)号：CN106591309A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611112241.0
申请日：2016-12-07
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
CPC classification number: C07K14/32 , C12N15/75 , C12N2800/101 , C12N2830/002 , C12N2840/002
Abstract: 本发明公开了一种茶碱诱导型基因表达系统，属于微生物生物技术领域。本发明以组成型强启动子P43为基础组件，融合经过改造了人工SD元件和SD序列和起始密码之间的间隔区长度的茶碱控制元件riboE1，构建出茶碱诱导型基因表达元件P43‑riboE1，并将序列克隆至枯草芽孢杆菌表达载体pBSG中，构建出诱导表达载体pBSG11，转化宿主168菌，使外源基因在茶碱控制下实现高水平、高诱导率表达。利用此重组菌实现了报告基因GFP，GUS和天冬氨酸酶的高效、可控重组表达。茶碱相比木糖、IPTG等诱导剂，具有无毒、价格低廉等优势，利用它作为诱导剂的基因表达系统具有较广阔的应用空间。
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公开(公告)号：CN114107309A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111391569.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/115 , C12N15/75 , C12N15/67 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种非天然茶碱RNA分子开关，属于基因工程技术领域。本发明通过设计随机序列获得一系列非天然茶碱核糖开关，以绿色荧光蛋白基因为目的基因，通过对本底荧光强度/OD600、诱导后荧光强度/OD600和诱导率三个指标综合评价筛选，得到了一种可调控外源蛋白表达的茶碱核糖开关2nt。当茶碱核糖开关2nt与启动子P43组合时，诱导水平高与不含有茶碱核糖开关的表达水平相近，诱导率达到6.5倍。当以天冬氨酶和β‑葡糖醛酸苷酶基因为目的基因时，加入4mM茶碱溶液，可以使两种酶均成功受诱导而表达。该过程中不需要其他蛋白因子的参与，并且能够有效快速地实现基因调控。
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