公开(公告)号：CN108893439A

公开(公告)日：2018-11-27

申请号：CN201810695022.2

申请日：2018-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  杨海麟 ,  林荣 ,  王男

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及一种可高效表达葡萄糖脱氢酶的枯草芽胞杆菌工程菌，属于生物工程及基因工程技术领域。本发明以以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH)基因作为目的基因，以pMA5质粒或插入了启动子的pMA5质粒作为表达载体，以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，构建了一种可高效表达以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶的基因工程菌；采用此菌摇瓶发酵生产以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶，可使胞内酶活高达3626U/L。

公开(公告)号：CN108893439B

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201810695022.2

申请日：2018-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  杨海麟 ,  林荣 ,  王男

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明涉及一种可高效表达葡萄糖脱氢酶的枯草芽胞杆菌工程菌，属于生物工程及基因工程技术领域。本发明以以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶(FAD‑GDH)基因作为目的基因，以pMA5质粒或插入了启动子的pMA5质粒作为表达载体，以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，构建了一种可高效表达以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶的基因工程菌；采用此菌摇瓶发酵生产以FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶，可使胞内酶活高达3626U/L。

公开(公告)号：CN108486027A

公开(公告)日：2018-09-04

申请号：CN201810301960.X

申请日：2018-04-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 张玲 ,  杨海麟 ,  林荣

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶的生产、纯化方法，属于生物工程领域。本发明以大肠杆菌为宿主，表达来源于洋葱伯克霍尔德菌的葡萄糖脱氢酶，过分批补料，分阶段温度控制，进行葡萄糖脱氢酶表达。本发明酶葡萄糖脱氢酶活达到22200.0U/L，菌体量达69.8g/L；通过三步层析对粗酶液分离纯化，获得比酶活109U/mg的重组酶，酶的性质问题，适宜于工业化生产。