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公开(公告)号：CN113061642B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202110242666.8
申请日：2021-03-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用生物传感器高通量筛选构建乙醇酸高产菌的应用，属于高通量筛选技术领域。本发明结合特异性响应乙醇酸的两个生物传感器构建高效的高通量筛选方法，对代谢物小分子乙醇酸的多基因途径文库进行高通量筛选，在短时间内实现了乙醇酸多基因代谢途径的优化。本发明一方面基于平板抗性阻力选择高产菌株可极大的扩大筛选通量，简单快速富集高产菌株；另一方面，结合96孔板测定荧光的方法快速检测发酵液中乙醇酸的浓度。该方法的乙醇酸传感器和温敏型复制子结合可以实现质粒的反复消除，有利于迭代高通量筛选。通过以上改进有效提高了目标高产菌株的筛选灵敏性，提高了高产菌株的富集效率。
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公开(公告)号：CN113061642A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110242666.8
申请日：2021-03-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于生物传感器的高通量筛选方法及其在多基因代谢途径优化中的应用，属于高通量筛选技术领域。本发明结合特异性响应乙醇酸的两个生物传感器构建高效的高通量筛选方法，对代谢物小分子乙醇酸的多基因途径文库进行高通量筛选，在短时间内实现了乙醇酸多基因代谢途径的优化。本发明一方面基于平板抗性阻力选择高产菌株可极大的扩大筛选通量，简单快速富集高产菌株；另一方面，结合96孔板测定荧光的方法快速检测发酵液中乙醇酸的浓度。该方法的乙醇酸传感器和温敏型复制子结合可以实现质粒的反复消除，有利于迭代高通量筛选。通过以上改进有效提高了目标高产菌株的筛选灵敏性，提高了高产菌株的富集效率。
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公开(公告)号：CN110684792B
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN201910972552.1
申请日：2019-10-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N1/21 , C12Q1/6897 , C12Q1/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种可反复消除的乙醇酸传感器及其构建方法，属于合成生物技术领域。本发明以乙醇酸响应蛋白GlcC和乙醇酸结合机理为基础，增加远红色荧光蛋白的表达，排除了传统方法单细胞荧光中拷贝数及细胞大小造成的荧光信号干扰。本发明结合了大肠杆菌温敏型复制子Ori101，实现了高温培养反复消除。从而建立了一种精确反应乙醇酸含量且能够反复消除的乙醇酸生物传感器。对于强化乙醇酸的生产策略尤其是诱变育种具有重要意义，不仅为高通量筛选提供了重要工具，而且其可反复消除的特性极大的缩短了育种时间。
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公开(公告)号：CN110684792A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201910972552.1
申请日：2019-10-14
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N1/21 , C12Q1/6897 , C12Q1/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种可反复消除的乙醇酸传感器及其构建方法，属于合成生物技术领域。本发明以乙醇酸响应蛋白GlcC和乙醇酸结合机理为基础，增加远红色荧光蛋白的表达，排除了传统方法单细胞荧光中拷贝数及细胞大小造成的荧光信号干扰。本发明结合了大肠杆菌温敏型复制子Ori101，实现了高温培养反复消除。从而建立了一种精确反应乙醇酸含量且能够反复消除的乙醇酸生物传感器。对于强化乙醇酸的生产策略尤其是诱变育种具有重要意义，不仅为高通量筛选提供了重要工具，而且其可反复消除的特性极大的缩短了育种时间。
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