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公开(公告)号：CN114606254A
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115747280A
公开(公告)日：2023-03-07
申请号：CN202211441483.X
申请日：2022-11-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/26
Abstract: 一种副溶血弧菌类脂A提取纯化与结构分析的方法。本发明属于类脂A提取领域。本发明的目的是为了解决现有类脂A提取方法不适用于副溶血弧菌以及有机试剂用量大的技术问题。本发明的方法是针对特定的副溶血弧菌开发的游离与非游离类脂A的提取与提纯方法，提取LPS连接类脂A时，加入醋酸钠水解时将pH值调节到2.0‑2.5，与此同时，将磁力搅拌时间增长为2.5h，从而实现了副溶血弧菌LPS连接类脂A的高效提取，此外，提取副溶血弧菌游离类脂A时，本申请创新性的采用极少量的菌体以及少于传统方法约100倍有机试剂(氯仿、甲醇)的量进行副溶血弧菌的游离类脂A的提取，是一种较新且省时省力的提取菌株中游离类脂A的方法。
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公开(公告)号：CN114480464A
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202210235334.1
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/74 , C12N15/64 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌CRISPRi的双质粒构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明公开了CRISPRi工具质粒包括pSg132与pBAD33T‑d9质粒的构建方法。本发明提供了一种副溶血弧菌CRISPRi的2种质粒构建方法，经过重叠PCR与一步克隆方法构建CRISPRi工具质粒。同时也提供了双质粒在副溶血弧菌基因功能研究中的应用，可更快捷地研究基因尤其是关键基因的功能，或同时干扰多个基因对副溶血弧菌的影响。为副溶血弧菌基因功能研究提供了新的方法和技术，推动副溶血弧菌功能基因的研究发展。
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公开(公告)号：CN117343949A
公开(公告)日：2024-01-05
申请号：CN202311171041.2
申请日：2023-09-12
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/74 , C12N15/54 , C12N1/21 , C12P7/64 , G01N30/02 , G01N30/72 , G01N30/90 , C07H13/04 , C07H1/06 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一株只合成游离型的类脂A的副溶血弧菌，属于基因工程与生物工程技术领域。本发明通过同源比对，确定了副溶血弧菌ATCC33846的Kdo转移酶基因VP_RS01035，利用同源重组方法，在低温、低抗生素浓度下成功实现对副溶血弧菌染色体上基因VP_RS01035的删除，得到了副溶血弧菌VP_RS01035基因缺失株。该菌株在低温下可以生长，并只合成游离类脂A。本发明还公开了对上述菌株游离类脂A进行提取与分析鉴定的方法。
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公开(公告)号：CN114480464B
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202210235334.1
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/74 , C12N15/64 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12R1/63
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌CRISPRi的双质粒构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明公开了CRISPRi工具质粒包括pSg132与pBAD33T‑d9质粒的构建方法。本发明提供了一种副溶血弧菌CRISPRi的2种质粒构建方法，经过重叠PCR与一步克隆方法构建CRISPRi工具质粒。同时也提供了双质粒在副溶血弧菌基因功能研究中的应用，可更快捷地研究基因尤其是关键基因的功能，或同时干扰多个基因对副溶血弧菌的影响。为副溶血弧菌基因功能研究提供了新的方法和技术，推动副溶血弧菌功能基因的研究发展。
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公开(公告)号：CN114606254B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210235371.2
申请日：2022-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
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