一种高产β-榄香烯和germacrene A的重组菌的构建方法

    公开(公告)号:CN116240229B

    公开(公告)日:2024-06-18

    申请号:CN202310178204.3

    申请日:2023-02-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高产β‑榄香烯和germacreneA的重组菌的构建方法。首先,通过germacreneA合成酶的筛选和甲羟戊酸代谢途径的过表达实现β‑榄香烯和germacreneA的从头合成;然后,通过删除中心碳途径中的竞争途径确保了类异戊二烯途径中乙酰辅酶A、丙酮酸和甘油醛‑3‑磷酸的可用性;接着采用番茄红素颜色作为高通量筛选方法,通过易于出错的PCR诱变获得了优化的NSY305N。最后,在摇瓶中,通过关键途径酶、外排工程和翻译工程的最终构建的菌株β‑EL‑4产生了1161.09mg/L的β‑榄香烯和852.36mg/L的germacreneA,是目前报道的摇瓶水平的最高产量,在4‑L补料分批发酵中,β‑榄香烯和germacreneA的产量分别达到3.52g/L和2.13g/L。

    一种高产β-榄香烯和germacrene A的重组菌的构建方法

    公开(公告)号:CN116240229A

    公开(公告)日:2023-06-09

    申请号:CN202310178204.3

    申请日:2023-02-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种高产β‑榄香烯和germacreneA的重组菌的构建方法。首先,通过germacreneA合成酶的筛选和甲羟戊酸代谢途径的过表达实现β‑榄香烯和germacreneA的从头合成;然后,通过删除中心碳途径中的竞争途径确保了类异戊二烯途径中乙酰辅酶A、丙酮酸和甘油醛‑3‑磷酸的可用性;接着采用番茄红素颜色作为高通量筛选方法,通过易于出错的PCR诱变获得了优化的NSY305N。最后,在摇瓶中,通过关键途径酶、外排工程和翻译工程的最终构建的菌株β‑EL‑4产生了1161.09mg/L的β‑榄香烯和852.36mg/L的germacreneA,是目前报道的摇瓶水平的最高产量,在4‑L补料分批发酵中,β‑榄香烯和germacreneA的产量分别达到3.52g/L和2.13g/L。

    一种番茄红素环化酶突变体及其在构建视黄醛高产菌中的应用

    公开(公告)号:CN118562778A

    公开(公告)日:2024-08-30

    申请号:CN202410739865.3

    申请日:2024-06-07

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明提供了一种番茄红素环化酶突变体及其在构建视黄醛高产菌中的应用,构建得到了一种泛菌属(Pantoea)来源的番茄红素环化酶突变体(Phe49Tyr,Thr271Ile),将其用于构建视黄醛生产菌株中,将搭载甲羟戊酸途径的质粒pACYC‑ESMPD‑idi(包含甲羟戊酸代谢途径的基因:粪肠球菌E.faecalis来源的基因mvaE,mvaS,甲烷八叠球菌属M.mazei衍生的基因mvK,肺炎链球菌S.pneumoniae来源的基因mvaD,pmK,idi)、携带葡萄糖激酶(glK)和半乳糖渗透酶(galP)和丙酮酸氧化酶(pforA)的质粒pET‑AGG、携带番茄红素环化酶突变体基因的质粒pRSF‑crtEBYIIIBRBS转入大肠杆菌缺陷菌ΔpoxBΔppsAΔptsGΔcrrΔadhEΔldhAΔzwfΔybbOΔgdhA中表达得到重组菌,提高了视黄醛的产量和生产效率,为大肠杆菌生产视黄醛提供了有利指导方向。

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