一种利用双菌共培养体系生产羟基酪醇的方法

    公开(公告)号:CN116574623A

    公开(公告)日:2023-08-11

    申请号:CN202210798069.8

    申请日:2022-07-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用双菌共培养体系生产羟基酪醇的方法,属于微生物基因工程技术领域。本发明构建酿酒酵母工程菌株与大肠杆菌工程菌株的双菌共培养体系,优化并利用双菌共培养体系从头合成羟基酪醇。所述酿酒酵母工程菌株通过在宿主菌株中消除酪氨酸反馈抑制,引入外源提高产物代谢通量的路径及整合改造的GAL调控系统得到;所述大肠杆菌工程菌株通过在宿主菌株中过表达4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶和核黄素氧化还原酶得到,由此实现羟基酪醇的制备和高效合成;采用所述酿酒酵母工程菌株和大肠杆菌工程菌双菌共培养体系的羟基酪醇从头合成产量达到435.32mg/L,解决了单一野生菌株不能从头合成羟基酪醇的问题,为微生物高效发酵生产羟基酪醇提供了新思路。

    高产可溶性β-1,3-葡聚糖的根瘤菌基因工程改造及双阶段发酵方法

    公开(公告)号:CN117625507B

    公开(公告)日:2024-09-17

    申请号:CN202311630621.3

    申请日:2023-11-30

    Abstract: 本发明公开了高产可溶性β‑1,3‑葡聚糖的根瘤菌基因工程改造及双阶段发酵方法,属于微生物基因工程技术领域。本发明基于菌株ZB01,发掘到能够四个可以明显影响β‑1,3‑葡聚糖产量的基因,其中gluA表达与β‑1,3‑葡聚糖产量呈现负相关而gluN表达与β‑1,3‑葡聚糖产量呈现正相关趋势。通过敲除gluA以及过表达gluN,获得基因工程菌株;针对产物粘稠带来的传质阻力以及生长抑制问题,设计双阶段发酵体系(先生长后促进合成),即在菌株进入对数期末期添加诱导剂IPTG,使得β‑1,3‑葡聚糖的产量达到6.62g/L,有效解决了可溶性β‑1,3‑葡聚糖产量低的难题,为其工业化生产奠定了基础。

    高产可溶性β-1,3-葡聚糖的根瘤菌基因工程改造及双阶段发酵方法

    公开(公告)号:CN117625507A

    公开(公告)日:2024-03-01

    申请号:CN202311630621.3

    申请日:2023-11-30

    Abstract: 本发明公开了高产可溶性β‑1,3‑葡聚糖的根瘤菌基因工程改造及双阶段发酵方法,属于微生物基因工程技术领域。本发明基于菌株ZB01,发掘到能够四个可以明显影响β‑1,3‑葡聚糖产量的基因,其中gluA表达与β‑1,3‑葡聚糖产量呈现负相关而gluN表达与β‑1,3‑葡聚糖产量呈现正相关趋势。通过敲除gluA以及过表达gluN,获得基因工程菌株;针对产物粘稠带来的传质阻力以及生长抑制问题,设计双阶段发酵体系(先生长后促进合成),即在菌株进入对数期末期添加诱导剂IPTG,使得β‑1,3‑葡聚糖的产量达到6.62g/L,有效解决了可溶性β‑1,3‑葡聚糖产量低的难题,为其工业化生产奠定了基础。

    一种蔗糖磷酸化酶和葡萄糖异构酶级联催化合成黑曲霉二糖的方法

    公开(公告)号:CN114015735B

    公开(公告)日:2023-11-14

    申请号:CN202111413918.5

    申请日:2021-11-25

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶和葡萄糖异构酶级联催化合成黑曲霉二糖的方法,属于酶工程领域。本发明以来源于青春双歧杆菌蔗糖磷酸化酶(BaSP)和葡萄糖异构酶(GI)为研究对象,利用BaSP水解蔗糖产生的葡萄糖启动转糖苷反应,通过GI将副产物果糖转化为转糖苷受体葡萄糖,促进整个反应向转糖苷方向进行,抑制水解作用,最大程度利用副产物,并降低辅底物葡萄糖的添加。在单一底物蔗糖的条件下,级联反应的黑曲霉二糖产量约为BaSP单酶反应的192%,同时果糖产量降低为BaSP单酶反应的80%。本发明构建的酶级联反应对于促进黑曲霉二糖绿色、高效合成具有重要意义。

    通过构建体内CE-MI酶级联催化体系提高乳糖到乳果糖转化率

    公开(公告)号:CN117587000A

    公开(公告)日:2024-02-23

    申请号:CN202311589249.6

    申请日:2023-11-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了通过构建体内CE‑MI酶级联催化体系提高乳糖到乳果糖转化率,属于酶工程领域。本发明以大肠杆菌表达CsCE/Q371E实现乳糖的细胞发酵生产,通过将大肠杆菌的lacZ基因敲除将乳果糖产量达到3.55g/L。为解除依匹乳糖到乳果糖结构异构转化的限速步骤,提高乳糖到乳果糖转化率,挖掘到一款MmMI酶与CsCE酶级联催化,产量达到4.0g/L。通过定点饱和突变获得一款结构异构催化性能提升的突变体MmMI/F242N;在此基础上,通过RBS工程调控优化CsCE与MmMI的表达量,在添加8g/L乳清粉作为底物时摇瓶发酵,乳果糖产量达到6.12g/L,其转化率91.3%,为目前报道最高水平。

    一种蔗糖磷酸化酶和葡萄糖异构酶级联催化合成黑曲霉二糖的方法

    公开(公告)号:CN114015735A

    公开(公告)日:2022-02-08

    申请号:CN202111413918.5

    申请日:2021-11-25

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶和葡萄糖异构酶级联催化合成黑曲霉二糖的方法,属于酶工程领域。本发明以来源于青春双歧杆菌蔗糖磷酸化酶(BaSP)和葡萄糖异构酶(GI)为研究对象,利用BaSP水解蔗糖产生的葡萄糖启动转糖苷反应,通过GI将副产物果糖转化为转糖苷受体葡萄糖,促进整个反应向转糖苷方向进行,抑制水解作用,最大程度利用副产物,并降低辅底物葡萄糖的添加。在单一底物蔗糖的条件下,级联反应的黑曲霉二糖产量约为BaSP单酶反应的192%,同时果糖产量降低为BaSP单酶反应的80%。本发明构建的酶级联反应对于促进黑曲霉二糖绿色、高效合成具有重要意义。

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