公开(公告)号：CN114591880B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202210261054.8

申请日：2022-03-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  陈坚 ,  刘东明 ,  曾伟主 ,  余世琴 ,  堵国成

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除莽草酸激酶(aroL和aroK)阻止莽草酸的降解，然后再敲除磷酸烯醇式丙酮酸‑糖磷酸转移酶系统操纵子中的基因ptsI、葡萄糖转运酶基因ptsG，同时在基因组上用强的内源启动子Pssra‑infc替换葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(zwF)的本地启动子，最后再通过质粒表达强化关键基因酶tktA的表达，弱化aroK的表达，进一步提高莽草酸的积累。将本发明构建得到的重组大肠杆菌在发酵罐体系中发酵生产莽草酸，发酵78h，可以积累63.494g/L的莽草酸，对工业化生物法生产莽草酸具有重要的意义。

公开(公告)号：CN118956711A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411039622.5

申请日：2024-07-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  曾伟主 ,  刘东明 ,  徐沙 ,  单小玉

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12N9/10 ,  C12N9/12 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C07K14/245 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产3‑脱氢莽草酸的大肠杆菌及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在重组大肠杆菌基因组上整合表达3‑脱氢莽草酸合成的关键基因，并敲除副产物基因和竞争途径基因，提高了3‑脱氢莽草酸的合成能力。为减少发酵过程中芳香族氨基酸的添加并同时解决缺乏芳香族氨基酸影响菌株生长的问题，本发明引入温控表达系统控制aroE的表达，通过调控菌株生长和发酵过程中的温度实现菌株的正常生长和DHS的高效合成。本发明构建的重组大肠杆菌发酵48h，DHS产量可达80.65g/L，葡萄糖转化率达41.2％，生产强度达1.68g/L/h，对工业化生物法生产3‑脱氢莽草酸具有重要的意义。

公开(公告)号：CN114591880A

公开(公告)日：2022-06-07

申请号：CN202210261054.8

申请日：2022-03-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  陈坚 ,  刘东明 ,  曾伟主 ,  余世琴 ,  堵国成

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可积累莽草酸的大肠杆菌的构建及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中敲除莽草酸激酶(aroL和aroK)阻止莽草酸的降解，然后再敲除磷酸烯醇式丙酮酸‑糖磷酸转移酶系统操纵子中的基因ptsI、葡萄糖转运酶基因ptsG，同时在基因组上用强的内源启动子Pssra‑infc替换葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶(zwF)的本地启动子，最后再通过质粒表达强化关键基因酶tktA的表达，弱化aroK的表达，进一步提高莽草酸的积累。将本发明构建得到的重组大肠杆菌在发酵罐体系中发酵生产莽草酸，发酵78h，可以积累63.494g/L的莽草酸，对工业化生物法生产莽草酸具有重要的意义。