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公开(公告)号：CN107746836B
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201711012785.4
申请日：2017-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种以活性形式表达的谷氨酰胺转氨酶突变体，属于酶工程和发酵工程领域。本发明通过对谷氨酰胺转氨酶成熟区进行定点突变，改变谷氨酰胺转氨酶活性位点附近的氨基酸残基，提高谷氨酰胺转氨酶的催化效率，得到了谷氨酰胺转氨酶酶活的进一步提高的重组菌hpro‑E300W。重组菌hpro‑E300W发酵罐发酵酶活可达59.85U/mL，是目前报道的发酵水平的最高值。此外，本发明通过在谷氨酰胺转氨酶中插入解脂耶氏酵母内源性蛋白酶Kex2识别位点现了谷氨酰胺转氨酶在解脂耶氏酵母中的活性表达。发酵生产杂蛋白少，纯化简单，可降低工业化生产谷氨酰胺转氨酶的成本。
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公开(公告)号：CN105274080B
公开(公告)日：2018-08-07
申请号：CN201510766758.0
申请日：2015-11-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了种热稳定性提高的肌酸水解酶突变体,属于酶工程领域,所述突变体是对肌酸水解酶氨基酸序列的第368位氨基酸进行突变。所述肌酸水解酶来源于大肠杆菌。所述突变体是将第368位的缬氨酸突变为蛋氨酸,得到突变体V368M。所述突变是对来源于大肠杆菌的肌酸水解酶蛋白质内部氨基酸进行定点突变,从而提高了肌酸酶的热稳定性。相对于现有的突变体V368M的半衰期提高了5倍,其Tm值提高了3℃。
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公开(公告)号：CN106282148A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610920514.8
申请日：2016-10-21
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/82 , C12Y305/01001
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的天冬酰胺酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过对SEQ ID NO.1所示天冬酰胺酶进行定点饱和突变，改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高天冬酰胺酶催化效率，进一步提高天冬酰胺酶产量。本发明构建的天冬酰胺酶分泌能力增强的重组枯草芽孢杆菌可将天冬酰胺酶酶活较出发菌株提高2.37倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产天冬酰胺酶酶活达到320U/mL，为目前报道的摇瓶的最高的产量，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN103709236B
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201310716775.4
申请日：2013-12-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种可提高分泌效率的信号肽，核苷酸序列如1）或2所示1）核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；2）对SEQ ID NO.1序列做出改造，但仍就行使信号肽功能且分泌效率未发生根本改变的核苷酸序列。本发明提供了一种可提高分泌效率的信号肽，使用后可显著提高菌株的分泌能力，本发明中可将天冬酰胺酶酶活提高了1.5倍。改造后的菌株产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN107746836A
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201711012785.4
申请日：2017-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种以活性形式表达的谷氨酰胺转氨酶突变体，属于酶工程和发酵工程领域。本发明通过对谷氨酰胺转氨酶成熟区进行定点突变，改变谷氨酰胺转氨酶活性位点附近的氨基酸残基，提高谷氨酰胺转氨酶的催化效率，得到了谷氨酰胺转氨酶酶活的进一步提高的重组菌hpro-E300W。重组菌hpro-E300W发酵罐发酵酶活可达59.85U/mL，是目前报道的发酵水平的最高值。此外，本发明通过在谷氨酰胺转氨酶中插入解脂耶氏酵母内源性蛋白酶Kex2识别位点现了谷氨酰胺转氨酶在解脂耶氏酵母中的活性表达。发酵生产杂蛋白少，纯化简单，可降低工业化生产谷氨酰胺转氨酶的成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105349515A
公开(公告)日：2016-02-24
申请号：CN201510837174.8
申请日：2015-11-25
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/82 , A61K38/00 , C12Y305/01001 , A61K35/742 , A61K38/50 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种分泌能力提高的天冬酰胺酶突变体及其应用，属于酶工程领域。本发明通过对野生天冬酰胺酶的氨基酸序列的N端的进行氨基酸缺失突变，得到了一种分泌能力提高的天冬酰胺酶突变体，并构建了表达该突变体的重组菌。与野生天冬酰胺酶相比，本发明的突变体的胞外分泌能力提高了3.14倍。本发明构建的重组菌，发酵生产天冬酰胺酶酶活达到407.6U/mL，生产率达到9.26U/(mL/h)，为目前报道的最高的产量。
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公开(公告)号：CN105274080A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510766758.0
申请日：2015-11-11
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/78 , C12Y305/03003
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的肌酸水解酶突变体，属于酶工程领域，所述突变体是对肌酸水解酶氨基酸序列的第368位氨基酸进行突变。所述肌酸水解酶来源于大肠杆菌。所述突变体是将第368位的缬氨酸突变为蛋氨酸，得到突变体V368M。所述突变是对来源于大肠杆菌的肌酸水解酶蛋白质内部氨基酸进行定点突变，从而提高了肌酸酶的热稳定性。相对于现有的突变体V368M的半衰期提高了5倍，其Tm值提高了3℃。
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公开(公告)号：CN106434612B
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201610921018.4
申请日：2016-10-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种天冬酰胺酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过替换天冬酰胺酶柔性loop区域氨基酸并定点突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高天冬酰胺酶催化效率，进一步提高天冬酰胺酶产量。本发明构建的天冬酰胺酶分泌能力增强的重组枯草芽孢杆菌可将天冬酰胺酶酶活较出发菌株提高3.67倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产天冬酰胺酶酶活达到500U/mL，为目前报道的摇瓶的最高的产量，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN104611317B
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201510102732.6
申请日：2015-03-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高L‑天冬酰胺酶分泌表达的方法，属于基因工程领域。本发明通过在天冬酰胺酶的N端融合pelB信号肽，使重组菌的胞外天冬酰胺酶酶活提高了20倍，进一步共表达lepB信号肽酶，可将天冬酰胺酶酶活在此基础上提高1.45倍。改造后的菌株产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN106434612A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610921018.4
申请日：2016-10-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种天冬酰胺酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过替换天冬酰胺酶柔性loop区域氨基酸并定点突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高天冬酰胺酶催化效率，进一步提高天冬酰胺酶产量。本发明构建的天冬酰胺酶分泌能力增强的重组枯草芽孢杆菌可将天冬酰胺酶酶活较出发菌株提高3.67倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产天冬酰胺酶酶活达到500U/mL，为目前报道的摇瓶的最高的产量，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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