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公开(公告)号：CN110106231A
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201910325530.6
申请日：2019-04-22
Applicant: 武汉大学
IPC: C12Q1/6809
Abstract: 本发明公开了一种利用dUTP或dTTP检测核酸中腺嘌呤N6或N1位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成：第一部分是通过延伸反应将三磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUTP）或三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）掺入DNA序列。第二部分是通过变性聚丙烯酰胺凝胶分析得到含有不同位点的链的延伸百分比，处理后可判断含有不同位点的链的延伸速率从而达到识别检测N6-甲基腺嘌呤和N1-甲基腺嘌呤的目的。该方法克服了现有检测方法设备需求高、原料昂贵、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广。
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公开(公告)号：CN105463110B
公开(公告)日：2019-01-29
申请号：CN201610019896.7
申请日：2016-01-13
Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 , 武汉大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明涉及一种利用滚环扩增‑环介导等温扩增两步扩增法检测MicroRNA的方法。首先设计一个以目标microRNA为环化连接探针的线性滚环扩增模板，并以该线性滚环扩增模板为引物进行滚环扩增，实现信号的第一步放大；然后将滚环扩增产物用限制性内切酶切割成相同的短单链，以这些短单链为模板进行环介导扩增，实现信号的第二步放大。环介导等温扩增的扩增过程由实时荧光定量PCR监测，扩增的样品中加入DNA显色剂，当扩增的DNA产物增多时，DNA显色剂的荧光增强，其荧光信号被实时荧光定量PCR采集和输出。本发明采用两步扩增法放大microRNA的信号，是一种低背景高灵敏度的检microRNA的方法。
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公开(公告)号：CN110106231B
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN201910325530.6
申请日：2019-04-22
Applicant: 武汉大学
IPC: C12Q1/6809
Abstract: 本发明公开了一种利用dUTP或dTTP检测核酸中腺嘌呤N6或N1位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成：第一部分是通过延伸反应将三磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUTP）或三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）掺入DNA序列。第二部分是通过变性聚丙烯酰胺凝胶分析得到含有不同位点的链的延伸百分比，处理后可判断含有不同位点的链的延伸速率从而达到识别检测N6‑甲基腺嘌呤和N1‑甲基腺嘌呤的目的。该方法克服了现有检测方法设备需求高、原料昂贵、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广。
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公开(公告)号：CN105463110A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201610019896.7
申请日：2016-01-13
Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 , 武汉大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种利用滚环扩增-环介导等温扩增两步扩增法检测MicroRNA的方法。首先设计一个以目标microRNA为环化连接探针的线性滚环扩增模板，并以该线性滚环扩增模板为引物进行滚环扩增，实现信号的第一步放大；然后将滚环扩增产物用限制性内切酶切割成相同的短单链，以这些短单链为模板进行环介导扩增，实现信号的第二步放大。环介导等温扩增的扩增过程由实时荧光定量PCR监测，扩增的样品中加入DNA显色剂，当扩增的DNA产物增多时，DNA显色剂的荧光增强，其荧光信号被实时荧光定量PCR采集和输出。本发明采用两步扩增法放大microRNA的信号，是一种低背景高灵敏度的检microRNA的方法。
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公开(公告)号：CN110093399A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201910325528.9
申请日：2019-04-22
Applicant: 武汉大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明公开了一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成。第一部分是对被测核酸或对照核酸通过延伸反应将二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUDP）掺入基因组序列。第二部分是使用变性聚丙烯酰胺凝胶分析延伸反应结果，经数据处理后得到被测核酸或对照核酸的延伸百分比，进行比较从而实现识别检测N6-甲基腺嘌呤和N1-甲基腺嘌呤。该方法克服了现有检测方法设备需求高、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广，所用原料简单易得，操作简便。
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