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公开(公告)号:CN119193646A
公开(公告)日:2024-12-27
申请号:CN202410992753.9
申请日:2024-07-24
Applicant: 杭州恩和生物科技有限公司
Abstract: 本公开涉及一种类球红细菌工程菌的化学转化方法,属于遗传工程领域。该方法只需要一步转化即可得到类球红细菌的转化子,无需经过两步菌株筛选,且无需对类球红细菌中编码限制性内切酶的RshⅠ基因进行敲除,能够简化类球红细菌遗传改造的过程,提高类球红细菌遗传改造的通量、加速筛选获得目标菌株,大大缩短对类球红细菌运用于工业化生产的周期。
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公开(公告)号:CN115181753B
公开(公告)日:2024-07-26
申请号:CN202111660667.0
申请日:2021-12-31
Applicant: 杭州恩和生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种类红球细菌接合转化方法,其包括以下步骤:(1)培养基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001;(2)转化靶标质粒进入所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001,得到含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001;(3)培养通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001至OD600为0.3~0.7;(4)培养类球红细菌至OD660为1.8~2.0;(5)将步骤(3)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001和步骤(4)得到的类球红细菌混合,进一步培养;(6)得到含有靶标质粒的类红球细菌。使用本发明的接合转化方法,避免了再次涂布分离大肠杆菌和类球红细菌,并且提高了接合转化效率,使得获得的类球红细菌单克隆菌株相比于其他条件提高至少3倍。
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公开(公告)号:CN115181753A
公开(公告)日:2022-10-14
申请号:CN202111660667.0
申请日:2021-12-31
Applicant: 杭州恩和生物科技有限公司
Abstract: 本发明提供一种类红球细菌接合转化方法,其包括以下步骤:(1)培养基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001;(2)转化靶标质粒进入所述基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001,得到含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001;(3)培养通过步骤(2)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001至OD600为0.3~0.7;(4)培养类球红细菌至OD660为1.8~2.0;(5)将步骤(3)得到的含靶标质粒的基因缺陷型大肠杆菌SD1149‑001和步骤(4)得到的类球红细菌混合,进一步培养;(6)得到含有靶标质粒的类红球细菌。使用本发明的接合转化方法,避免了再次涂布分离大肠杆菌和类球红细菌,并且提高了接合转化效率,使得获得的类球红细菌单克隆菌株相比于其他条件提高至少3倍。
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