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公开(公告)号：CN103382444B
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310033477.5
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
Abstract: 本发明涉及遗传工程和发酵工程领域，具体公开了一种能降解结晶纤维素的基因重组酿酒酵母。该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶基因、外切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因按照1:3:2的比例通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。本发明将上述三种酶基因按1:3:2的比例同时转入酿酒酵母中实现分泌表达，从而使得本发明的重组酵母能够按1:3:2的最佳协同作用比例同时分泌EG、CBH、BGL三种纤维素酶，因此能够较高效地降解结晶纤维素，进一步提高了纤维素-乙醇的转化效率。
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公开(公告)号：CN111850070A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010737763.X
申请日：2020-07-28
Applicant: 暨南大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种用磷酸钠和过氧化氢预处理甘蔗渣的方法，包括如下步骤：将甘蔗渣风干后进行粉碎，筛选密封干燥保存；将处理好的甘蔗渣放入磷酸钠和过氧化氢混合溶液中进行一步或分步预处理；待反应结束后，冷却至室温，进行固液分离，固体部分用热水洗至中性，收集固体残渣，烘干至恒重；过氧化氢与磷酸钠组成的预处理液，能够显著提高酶解效率和木质素去除率，且混合预处理液中过氧化氢的负载量更低，加入过氧化氢不会明显降低体系的pH，能更好的改变甘蔗渣的表面形态。
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公开(公告)号：CN110305892A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910633361.2
申请日：2019-07-12
Applicant: 广东利世康低碳科技有限公司 , 广州利世康工业科技有限公司 , 暨南大学
Abstract: 验证CRISPR-Cas9系统介导目标基因插入产朊假丝酵母的可行性的方法，步骤：S1、构建包含Cas9片段的产朊假丝酵母表达载体；S2、扩增tRNAGlu基因、sgRNA下游表达单元，并重叠PCR连接并引入酶切位点，连接后与产朊假丝酵母载体结合得sgRNA初步重组质粒；S3、选定预插入和靶点序列，在靶点及互补序列5’端加粘性末端，退火成双链片段，与酶切后的初步重组质粒连接得sgRNA成熟重组质粒；S4、构建含有预插入序列左右同源臂的重组供体片段；S5、sgRNA重组质粒和重组供体片段转化携带Cas9的产朊假丝酵母；通过鉴定供体片段表达，验证了Cas9系统介导目标基因插入产朊假丝酵母是否可行。
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公开(公告)号：CN110305891A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910633290.6
申请日：2019-07-12
Applicant: 广东利世康低碳科技有限公司 , 广州利世康工业科技有限公司 , 暨南大学
Abstract: 验证CRISPR-Cas9系统敲除产朊假丝酵母目标基因的可行性的方法，步骤：S1、测定产朊假丝酵母染色体倍数；S2、构建带Cas9片段的产朊假丝酵母表达载体；S3、构建含tRNAGlu基因、sgRNA下游表达单元的sgRNA初步质粒；S3、选定预敲除和靶点序列，在靶点及互补序列5’端加粘性末端，退火成双链，与初步质粒结合成sgRNA成熟重组质粒；S5、构建含敲除序列的重组供体片段；S6、sgRNA成熟重组质粒转化带Cas9片段的产朊假丝酵母；S7、成熟重组质粒和供体转化携带Cas9的产朊假丝酵母；检测敲除或敲除并引入外源基因的基因表达变化或表型变化验证Cas9介导产阮假丝酵母基因敲除是否可行。
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公开(公告)号：CN103103139B
公开(公告)日：2015-06-17
申请号：CN201310033518.0
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明涉及遗传工程和发酵工程领域，公开了一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母。该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶（EG）基因和β-葡萄糖苷酶（BGL）基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。该基因重组酿酒酵母可利用无定形纤维素做原料生产乙醇且具有操作简便、节能降耗、绿色环保的特点，在新一代石油替代产品——纤维素燃料乙醇的研制方面具有积极的推动作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111763695A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010739368.5
申请日：2020-07-28
Applicant: 暨南大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种用磷酸钠预处理甘蔗渣制备乙醇燃料的方法，包括如下步骤：将甘蔗渣风干后进行粉碎，筛选密封干燥保存；将处理好的甘蔗渣放入预处理溶液中进行预处理；预处理完成的甘蔗渣加入纤维素酶进行酶解；将酶解完成的甘蔗渣进行分步或同步糖化发酵；所述预处理溶液为磷酸钠溶液；本发明采用磷酸钠作为预处理溶液，预处理过程时间短，木质素去除率高，酶解效率也得到提升，有利于提高乙醇得率，且在乙醇发酵过程中耗时也更短。
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公开(公告)号：CN103103221B
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310033476.0
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
IPC: C12P7/10
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明涉及基因工程及发酵工程领域，具体公开了一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法。该方法是利用基因工程技术构建能分别分泌表达内切葡聚糖酶EG、外切葡聚糖酶CBH和β-葡萄糖苷酶BGL的三种基因重组酿酒酵母菌株，然后将上述三种基因重组酵母菌株混合培养，并以纤维素原料为唯一碳源发酵，可较高效地将纤维素直接转化为乙醇。本发明方法将产酶、纤维素水解和乙醇发酵在一个体系中完成，不需额外添加纤维素酶，可在发酵过程中直接分解纤维素并转化为乙醇，省略了糖化步骤，简化了操作，节省了成本，是一套绿色环保低碳的纤维素乙醇生产工艺。
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公开(公告)号：CN103382444A
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201310033477.5
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
Abstract: 本发明涉及遗传工程和发酵工程领域，具体公开了一种能降解结晶纤维素的基因重组酿酒酵母。该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶基因、外切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因按照1:3:2的比例通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。本发明将上述三种酶基因按1:3:2的比例同时转入酿酒酵母中实现分泌表达，从而使得本发明的重组酵母能够按1:3:2的最佳协同作用比例同时分泌EG、CBH、BGL三种纤维素酶，因此能够较高效地降解结晶纤维素，进一步提高了纤维素-乙醇的转化效率。
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公开(公告)号：CN103103139A
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201310033518.0
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明涉及遗传工程和发酵工程领域，公开了一种能降解无定形纤维素的基因重组酿酒酵母。该基因重组酿酒酵母是将内切β-1,4-葡聚糖酶（EG）基因和β-葡萄糖苷酶（BGL）基因通过酿酒酵母表达载体同时转入酿酒酵母并获得正确的分泌表达而构建成的。该基因重组酿酒酵母可利用无定形纤维素做原料生产乙醇且具有操作简便、节能降耗、绿色环保的特点，在新一代石油替代产品——纤维素燃料乙醇的研制方面具有积极的推动作用。
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公开(公告)号：CN103103221A
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201310033476.0
申请日：2013-01-29
Applicant: 广州分子生物技术有限公司 , 暨南大学
IPC: C12P7/10
CPC classification number: Y02E50/16
Abstract: 本发明涉及基因工程及发酵工程领域，具体公开了一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法。该方法是利用基因工程技术构建能分别分泌表达内切葡聚糖酶EG、外切葡聚糖酶CBH和β-葡萄糖苷酶BGL的三种基因重组酿酒酵母菌株，然后将上述三种基因重组酵母菌株混合培养，并以纤维素原料为唯一碳源发酵，可较高效地将纤维素直接转化为乙醇。本发明方法将产酶、纤维素水解和乙醇发酵在一个体系中完成，不需额外添加纤维素酶，可在发酵过程中直接分解纤维素并转化为乙醇，省略了糖化步骤，简化了操作，节省了成本，是一套绿色环保低碳的纤维素乙醇生产工艺。
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