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公开(公告)号：CN114214293A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
Applicant: 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114214293B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111599580.7
申请日：2021-12-24
Applicant: 无锡阿科力科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌细胞色素P450环氧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对来源于恶臭假单胞菌的细胞色素P450环氧酶进行改造，克服了之前野生型的酶因为过氧化氢逸散和酸醇对质子转化率低而导致的催化效率低的局限，最终得到最佳突变体Q6(PpCytPA250V/T255E/S296V/A297P/P298N)，以此突变体为催化剂，以降冰片烯为底物，转化后10mL规模摇瓶产量为72.05g/L，摩尔产率为61.59％，单位菌体生产环氧降冰片烷的能力为3.6g/g，几乎不产生羟基化副产物。因此大大降低了之前的高菌体量以及繁复的后期分离纯化过程，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112410385B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202011329678.6
申请日：2020-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450环氧酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种细胞色素P450环氧酶CytP，通过在大肠杆菌中表达所述环氧酶CytP，利用全细胞转化法，将降冰片烯转化为环氧降冰片烷。并从反应的pH、温度、相比和诱导时间等因素对CytP酶的两相催化体系进行优化，克服了之前P450单加氧酶环氧化活性低且催化特异性差的局限，可使得环氧降冰片烷产量达到36.81g/L，催化特性达到99％，环氧化反应摩尔产率达31.46％。从而大大降低了之前的底物成本和环境污染等问题，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108587997A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810447027.3
申请日：2018-05-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9-OH-AD的方法，属于生物工程和生物技术领域。本发明通过大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Mycobacterium sp.Strain VKM Ac-1817D的3-甾酮9α-羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB成功在C.glutamicum ATCC13032中共表达。以此工程菌全细胞菌体作为生物催化剂，转化生产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮，底物雄甾-4-烯-3,17-二酮的摩尔转化率达到99.5％。本发明方法生产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮具有效率高，专一性强,能耗低等优点。
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公开(公告)号：CN109486847A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108587997B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201810447027.3
申请日：2018-05-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌全细胞转化生产9‑OH‑AD的方法，属于生物工程和生物技术领域。本发明通过大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌之间的穿梭质粒pXMJ19，将来源于Mycobacterium sp.Strain VKM Ac‑1817D的3‑甾酮9α‑羟基化酶的氧化亚基KshA，还原亚基KshB成功在C.glutamicum ATCC13032中共表达。以此工程菌全细胞菌体作为生物催化剂，转化生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮，底物雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮的摩尔转化率达到99.5％。本发明方法生产9α‑羟基雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮具有效率高，专一性强,能耗低等优点。
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公开(公告)号：CN109652417B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201811542085.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P21/00 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种构建高效枯草芽孢杆菌启动子的方法，属于基因工程技术领域。本发明将不同sigma亚基识别的天然启动子串联得到一些双串联、三串联启动子，并在启动子串联的基础之上优化了启动子核心区之间的间隔序列长度进一步提升了启动子的活性，最后将启动子进行不同的RBS设计，不仅验证了该策略可以提升启动子和其他基因表达调控元件之间的兼容性，也对外源基因的表达进行了可控的调节。通过本发明提供的方法，我们可以用简便的启动子设计和改造方法获得活性更高、设计性和兼容性更强的启动子。该方法简单、易于实现，在构建外源蛋白高效表达系统和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109486847B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN112410385A
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN202011329678.6
申请日：2020-11-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450环氧酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种细胞色素P450环氧酶CytP，通过在大肠杆菌中表达所述环氧酶CytP，利用全细胞转化法，将降冰片烯转化为环氧降冰片烷。并从反应的pH、温度、相比和诱导时间等因素对CytP酶的两相催化体系进行优化，克服了之前P450单加氧酶环氧化活性低且催化特异性差的局限，可使得环氧降冰片烷产量达到36.81g/L，催化特性达到99％，环氧化反应摩尔产率达31.46％。从而大大降低了之前的底物成本和环境污染等问题，为环氧降冰片烷的工业化生产和绿色生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109652417A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811542085.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P21/00 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种构建高效枯草芽孢杆菌启动子的方法，属于基因工程技术领域。本发明将不同sigma亚基识别的天然启动子串联得到一些双串联、三串联启动子，并在启动子串联的基础之上优化了启动子核心区之间的间隔序列长度进一步提升了启动子的活性，最后将启动子进行不同的RBS设计，不仅验证了该策略可以提升启动子和其他基因表达调控元件之间的兼容性，也对外源基因的表达进行了可控的调节。通过本发明提供的方法，我们可以用简便的启动子设计和改造方法获得活性更高、设计性和兼容性更强的启动子。该方法简单、易于实现，在构建外源蛋白高效表达系统和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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