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公开(公告)号：CN109486847B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114350660B
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202111458760.3
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Lux群体感应元件的枯草芽孢杆菌自诱导基因表达系统，属于基因工程技术领域。本发明将来源于V.fischeri的lux群体感应系统重新设计，并在野生型PluxI启动子的基础之上对其‑10区上游4bp进行随机建库获得了活性提升的突变体启动子P22，P47，P56和P58，并以sfGFP作为报告基因来检测所述系统表达外源蛋白的水平，将sfGFP置于PluxI，P22，P47，P56和P58启动子下游，结果显示突变后的启动子较野生型PluxI有了明显的提升。本发明提供的这种系统可高效表达外源蛋白，从而在外源蛋白高效表达和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114250245A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111466182.8
申请日：2021-12-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cpf1的高效基因编辑系统的构建，属于基因工程技术领域。本发明首先表征了来自于F.novicida的Cas蛋白Cpf1，将FnCpf1整合到枯草芽孢杆菌基因组的lacA位点。靶向不同基因的crRNA，将该crRNA置于枯草芽孢杆菌来源的强组成型启动子Pveg的下游，用于高强度表达对应的crRNA。通过选用不同靶向基因的crRNA，该基因组编辑方法被验证。菌落PCR结果显示，sacA基因，ligDV基因以及pps基因簇均能够实现高效的敲除。同时，为了验证该系统的敲入效率，外源基因sfGFP被高效敲除到sacA位点。为了进一步验证该系统的多基因敲除效率，本发明选择了sacA和aprE作为靶标，菌落PCR结果显示出了高效的敲除效率。
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公开(公告)号：CN109652418B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201811547733.1
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种新终止子及其应用，属于基因工程技术领域。本发明首先对单终止子的活性进行表征，通过不同活性的终止子进行组合串联的方式，得到了一系列可提高目的蛋白产量的新型终止子，以绿色荧光蛋白基因作为终止子上游基因，以红色荧光蛋白基因作为终止子下游基因，表征终止子对上下游基因的调控水平。结果表明，这些新型终止子对于提高上游基因表达量和抑制下游基因表达量都有良好的效果。这对在枯草芽孢杆菌中生产目的蛋白具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN117487778A
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202311435035.3
申请日：2023-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种全新的基于CRISPR‑Cas12b的碱基编辑器的构建及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对BhCas12b进行失活突变，获得了失活版本的dBhCas12b。本发明基于dBhCas12b，在微生物中构建了具有拓展编辑窗口的碱基编辑器，编辑窗口在大肠杆菌中最高可达63nt，是目前微生物细胞中编辑窗口最宽的CBE系统。最终，本发明将该系统用于基因表达的多样化以及蛋白质的原位进化中，并且获得了一系列梯度表达的构建体以及高版本底盘细胞。本发明提供了一种超宽编辑窗口的新型BE系统，该系统能够在代谢工程、蛋白质工程以及基因工程的各个方面体现出巨大的应用价值。
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公开(公告)号：CN114350660A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111458760.3
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Lux群体感应元件的枯草芽孢杆菌自诱导基因表达系统，属于基因工程技术领域。本发明将来源于V.fischeri的lux群体感应系统重新设计，并在野生型PluxI启动子的基础之上对其‑10区上游4bp进行随机建库获得了活性提升的突变体启动子P22，P47，P56和P58，并以sfGFP作为报告基因来检测所述系统表达外源蛋白的水平，将sfGFP置于PluxI，P22，P47，P56和P58启动子下游，结果显示突变后的启动子较野生型PluxI有了明显的提升。本发明提供的这种系统可高效表达外源蛋白，从而在外源蛋白高效表达和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109486847A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811542046.0
申请日：2018-12-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了基于人工串联启动子的枯草芽孢杆菌高效诱导表达系统，属于基因工程技术领域。本发明利用一种高效的人工串联组成型启动子，通过将该启动子与操纵子相关元件(阻遏蛋白及其结合位点)组合设计，进而使该组成型启动子的活性受到诱导剂的调控，最终构建出受诱导剂诱导的枯草芽孢杆菌高效诱导型表达系统。结果表明，与P43强组成型启动子相比，本系统中的人工串联启动子活性高出15倍左右。并且可以通过添加不同浓度的诱导剂精准控制启动子活性。因此本高效表达系统结构简单、活性高、调控严谨，在异源蛋白高效表达和合成生物学研究中有广阔的应用前景。
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