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公开(公告)号：CN113845579A
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202111348007.9
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种提高球孢白僵菌对棉铃虫杀伤效率的免疫凝集素的制备方法，利用快速克隆技术，将棉铃虫CTL26克隆到pET‑28a载体，在体外获得了有活性的重组蛋白。通过显微注射的方式，对棉铃虫幼虫进行了感染实验，发现球孢白僵菌能对棉铃虫进行有效的杀伤，而使用重组CTL26处理的球孢白僵菌，对棉铃虫的杀伤效率显著提高，该蛋白为新型生物农药的研制提供了可用的靶标。本发明所涉及的棉铃虫免疫凝集素CTL26能提高球孢白僵菌对害虫的杀伤效率，具有实际的经济效益。
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公开(公告)号：CN119913203A
公开(公告)日：2025-05-02
申请号：CN202510086500.X
申请日：2025-01-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种人源TFEB基因转基因果蝇模型的构建方法及应用，构建方法包括如下步骤：S1、将人源TFEB基因编码区序列插入UASp‑HA‑attB载体中，构建UASp‑TFEB‑HA‑attB质粒；S2、将步骤S1构建的质粒导入带attP的果蝇胚胎；S3、将孵化出的G0代果蝇与白眼果蝇杂交，筛选出红眼果蝇，即为UASp‑TFEB‑HA转基因果蝇。本发明利用转基因技术将人源TFEB基因的编码序列导入果蝇中，制备UASp‑TFEB‑HA转基因果蝇；在不同的组织中驱动TFEB的表达，可以诱导细胞出现与哺乳动物细胞中过表达TFEB类似的自噬水平增加等表型，表明TFEB在果蝇中具有和哺乳动物中的生理功能，可以为解析TFEB活化引起的肿瘤发生机制提供良好的模型，也为TFEB活性异常导致的疾病药物筛选提供工具。
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公开(公告)号：CN119776433A
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202510086502.9
申请日：2025-01-20
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113 , A01K67/0275 , A01K67/0276 , A61K49/00
Abstract: 本发明公开了一种RagC突变体果蝇的构建方法及应用，构建方法包括如下步骤：将在RagC基因编码区两端设计的gRNA的表达序列插入载体质粒中获得连接质粒；将连接质粒导入表达Cas9蛋白的果蝇胚胎，然后与二号染色体带SM6平衡染色体的果蝇杂交，鉴定筛选出RagC‑/SM6的杂合子果蝇，即为RagC基因缺失突变体果蝇；将结合GTP和GDP的RagC基因的编码区序列分别插入UASp表达质粒，将表达质粒导入表达重组酶的白眼果蝇胚胎，将该果蝇与带有平衡染色体的果蝇进行杂交、筛选，获得RagC转基因果蝇；将RagC基因缺失突变体果蝇与RagC转基因果蝇杂交，获得仅表达突变形式RagC蛋白而无野生型RagC蛋白表达的果蝇，为阐明RagC突变蛋白引起的疾病发生机制提供基础，为临床干预和药物靶点筛选提供思路和工具。
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公开(公告)号：CN116326549B
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202310472708.6
申请日：2023-04-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/68 , C12N15/113 , C12N15/89 , G01N33/58 , G01N33/569 , G01N21/84
Abstract: 本发明涉及一种能够诱导肠道酸度异常转基因果蝇的构建及鉴定方法，构建了果蝇转基因载体pValium20‑RagA RNAi，通过显微注射的方法获得了RagA RNAi转基因果蝇，通过与双平衡子（Double balancer）果蝇SP/SM6;MKRS/TM6杂交两代得到带有平衡子基因且能稳定遗传的UAS‑RagA RNAi转基因果蝇SP/SM6;UAS‑RagA RNAi/TM6，通过与在肠道上皮细胞中驱动基因表达的NP1‑GAL4果蝇杂交，得到在肠道中敲减RagA的NP1‑GAL4；UAS‑RagA RNAi果蝇。通过表型检测发现，该果蝇肠道形态异常；利用喂食溴酚蓝和甲酚紫的方法发现，RagA敲减果蝇肠道中的酸度降低；利用免疫荧光检测铜细胞的方法，确定果蝇胃肠道酸度异常的表型与分泌氢离子的细胞数目减少有关。这些结果确认了RagA敲减果蝇的肠道酸度异常。本发明可用于更快更方便地筛选对胃肠道酸度缺陷疾病有针对性的药物。
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公开(公告)号：CN116326549A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202310472708.6
申请日：2023-04-27
Applicant: 扬州大学
IPC: A01K67/033 , C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/89 , G01N33/58 , G01N33/569 , G01N21/84
Abstract: 本发明涉及一种能够诱导肠道酸度异常转基因果蝇的构建及鉴定方法，构建了果蝇转基因载体pValium20‑RagA RNAi，通过显微注射的方法获得了RagA RNAi转基因果蝇，通过与双平衡子（Double balancer）果蝇SP/SM6;MKRS/TM6杂交两代得到带有平衡子基因且能稳定遗传的UAS‑RagA RNAi转基因果蝇SP/SM6;UAS‑RagA RNAi/TM6，通过与在肠道上皮细胞中驱动基因表达的NP1‑GAL4果蝇杂交，得到在肠道中敲减RagA的NP1‑GAL4；UAS‑RagA RNAi果蝇。通过表型检测发现，该果蝇肠道形态异常；利用喂食溴酚蓝和甲酚紫的方法发现，RagA敲减果蝇肠道中的酸度降低；利用免疫荧光检测铜细胞的方法，确定果蝇胃肠道酸度异常的表型与分泌氢离子的细胞数目减少有关。这些结果确认了RagA敲减果蝇的肠道酸度异常。本发明可用于更快更方便地筛选对胃肠道酸度缺陷疾病有针对性的药物。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112553253B
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202011500154.9
申请日：2020-12-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/61 , A01K67/033
Abstract: 本发明涉及一种fkbp39突变体果蝇模型的构建及鉴定方法，通过显微注射到的方式获得了fkbp39的突变体果蝇品系，并通过与doublebalance果蝇进行杂交与回交得到带有平衡基因且可以稳定遗传的fkbp39突变体果蝇；最后利用PCR和westernblot的方法，鉴定了fkbp39突变体果蝇。本发明利用Crispr/cas9和显微注射技术，构建了fkbp39突变体果蝇模型，为FK506免疫抑制来治疗与TOR失调而引起的疾病提供了材料。
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公开(公告)号：CN113845579B
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202111348007.9
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种提高球孢白僵菌对棉铃虫杀伤效率的免疫凝集素的制备方法，利用快速克隆技术，将棉铃虫CTL26克隆到pET‑28a载体，在体外获得了有活性的重组蛋白。通过显微注射的方式，对棉铃虫幼虫进行了感染实验，发现球孢白僵菌能对棉铃虫进行有效的杀伤，而使用重组CTL26处理的球孢白僵菌，对棉铃虫的杀伤效率显著提高，该蛋白为新型生物农药的研制提供了可用的靶标。本发明所涉及的棉铃虫免疫凝集素CTL26能提高球孢白僵菌对害虫的杀伤效率，具有实际的经济效益。
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公开(公告)号：CN115976025A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202211637655.0
申请日：2022-12-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , A01N57/16 , A01P7/04
Abstract: 本发明涉及一种靶向棉铃虫转录因子Kr‑h1基因敲除的sgRNA筛选与应用，所述sgRNA为sgRNA1、sgRNA2；其中：sgRNA1的序列为：AAAGAACGACCCTACCGATG，该序列位于棉铃虫Kr‑h1编码区307bp位置；sgRNA2的序列为：GACGGCATCTGTTGATTGCG，该序列位于棉铃虫Kr‑h1编码区767bp位置。sgRNA的筛选方法是根据Kr‑h1的核苷酸序列，使用在线工具Crispor设计两个sgRNA，在体外使用PCR和T7转录技术，获得两个sgRNA，即sgRNA1、sgRNA2，并进行纯化。本发明方法先进科学，两个sgRNA介导的Kr‑h1基因敲除能引起棉铃虫发育障碍或死亡，可以作为其生物防治的靶标。
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公开(公告)号：CN112553253A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011500154.9
申请日：2020-12-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/61 , A01K67/033
Abstract: 本发明涉及一种fkbp39突变体果蝇模型的构建及鉴定方法，通过显微注射到的方式获得了fkbp39的突变体果蝇品系，并通过与doublebalance果蝇进行杂交与回交得到带有平衡基因且可以稳定遗传的fkbp39突变体果蝇；最后利用PCR和westernblot的方法，鉴定了fkbp39突变体果蝇。本发明利用Crispr/cas9和显微注射技术，构建了fkbp39突变体果蝇模型，为FK506免疫抑制来治疗与TOR失调而引起的疾病提供了材料。
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公开(公告)号：CN109884290A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910235875.2
申请日：2019-03-27
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，属于生物技术领域，具体是一种利用nprl3突变体果蝇快速鉴定蜂王浆功效的生物学方法。利用新鲜蜂王浆对突变体果蝇成活率、体内氧化物水平、能量代谢等具有影响的特性进行快速分析，来检测蜂王浆功效。本发明可用于快速检测和鉴定蜂王浆的有效成分和生物学功效，评判蜂王浆质量。
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