公开(公告)号：CN109957575A

公开(公告)日：2019-07-02

申请号：CN201910278888.8

申请日：2019-04-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  金甫 ,  王伟康 ,  胡高伟 ,  谢泉 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明涉及一种山羊痘病毒p32可溶性蛋白的制备方法，利用双酶切获得pGEX‑6p‑1线性化载体以及通过设计扩增山羊痘病毒p32基因片段的引物，利用T4连接酶连接，直接在体外快速重组，获得重组质粒pGEX‑6p‑1‑P32，并将其转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达、实现山羊痘病毒的p32蛋白与GST的融合可溶性表达，并获得纯化的可溶性蛋白GST‑P32；本发明设计的引物及基于T4连接酶的克隆策略，可快速构建山羊痘病毒p32基因的原核可溶性表达载体。本发明获得的山羊痘病毒p32可溶性表达及纯化的蛋白，可直接提供p32可溶性蛋白作为山羊痘病毒诊断抗原；作为免疫原获得抗p32蛋白多克隆抗体；为开展山羊痘病毒流行病学调查提供有效诊断试剂；并为进一步探究p32蛋白的生物学功能具有重要意义。