一种犬回肠上皮永生化细胞系的构建方法

    公开(公告)号:CN118620960A

    公开(公告)日:2024-09-10

    申请号:CN202410739537.3

    申请日:2024-06-07

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种犬回肠上皮永生化细胞系的构建方法,该构建方法包括如下步骤:将犬回肠组织进行原代培养;设计并构建靶向犬回肠上皮细胞中hTERT基因的sgRNA表达载体、含有hTERT基因的修复模板;将sgRNA表达载体、Cas9表达载体、含有hTERT基因的修复模板共转染至犬回肠上皮细胞,在hTERT基因位点产生DSB,并引导细胞通过同源重组修复机制,将hTERT基因序列敲入到目标位点,得到携带hTERT基因的犬回肠上皮细胞;将携带hTERT基因的犬回肠上皮细胞进一步培养得到永生化的犬回肠上皮细胞系。本发明永生化的hTERT‑CIECs按照2×105个细胞/25cm2,经过4天培养之后,细胞密度能够达到100%的汇合,增殖速度快;建立的永生化犬回肠上皮细胞系已传至50代,未出现任何衰老迹象,可永久保存。

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