公开(公告)号：CN109187703B

公开(公告)日：2020-09-08

申请号：CN201811107372.9

申请日：2018-09-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汪晓丽 ,  熊健 ,  封克 ,  王小兵

IPC: G01N27/416 ,  G01N27/333

Abstract: 本发明属于离子选择性微电极技术领域，具体涉及一种基于非损伤微测技术（NMT）的铜离子选择性微电极以及植物根尖铜离子流速测定方法，通过向微电极玻璃管内灌入长约1cm的连续无气泡灌充液，灌充液由1mM硝酸铜和0.1mM氯化钾溶液组成；再在显微镜下从尖端吸入一段长约40‑50µm的权利要求1所述的铜离子交换剂，并确保铜离子交换剂与灌充液之间无间隙无气泡。采用此配方制作的微电极成功地用于了测定植物根尖表面的铜离子流速。本发明建立了一种可用于NMT技术的Cu2+交换剂配方，在此基础上此制作的离子选择性玻璃微电极具有稳定的斜率和较高的选择性系数，可用于NMT技术测定活体样品表面的铜离子流速。

公开(公告)号：CN103103178A

公开(公告)日：2013-05-15

申请号：CN201310050673.3

申请日：2013-02-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 熊健 ,  黄亚娟 ,  侯丽云 ,  张华

IPC: C12N11/08

Abstract: 本发明涉及一种反应-吸附耦联固定化蛋白酶的制备方法。本发明的技术方案是在制备聚苯胺载体同时加入蛋白酶进行吸附的反应-吸附耦联固定化蛋白酶方法，本发明为以苯胺及苯胺衍生物为单体，加入引发剂和助剂，同时加入需固定化的游离蛋白酶，放置于恒温条件下反应，过滤洗涤得到以聚苯胺为载体的固定化蛋白酶。本发明克服了现有传统酶固定化方法存在的固定化过程复杂，酶与载体的生物相容性较差，其与载体之间的结合作用相对较弱，固定化酶的稳定性差，使用寿命低，其固定化反应通常较剧烈，容易造成酶的失活，活力降低等缺陷。本发明具有固定化过程简单，条件温和，效率高，固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力好，使用寿命长。

公开(公告)号：CN102899366A

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201210384359.4

申请日：2012-10-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 熊健 ,  张华 ,  黄亚娟 ,  侯丽云

IPC: C12P7/62 ,  C07C67/08 ,  C07C69/145 ,  C07C69/24 ,  C07C69/44 ,  C07C69/48 ,  C07C69/50 ,  C07C69/40 ,  C07C69/347

Abstract: 本发明涉及化学酶共催化制备酯的方法。本发明底物为脂肪酸或其酸酐和3，7-二甲基-6-辛烯-1-醇，无溶剂体系；采用生物催化剂和化学催化剂共同进行催化；反应体系是按照摩尔比3，7-二甲基-6-辛烯-1-醇∶脂肪酸＝1∶10～1∶1的比例配制或3，7-二甲基-6-辛烯-1-醇∶脂肪酸酐＝1∶10～1∶0.5的比例配制；生物催化剂按照质量比生物催化剂∶3，7-二甲基-6-辛烯-1-醇＝1∶1～1∶60的比例加入；化学催化剂按照质量比化学催化剂∶3，7-二甲基-6-辛烯-1-醇＝1∶100～1∶10的比例加入；在反应温度为10～80℃、摇床转速为50～300rpm的反应条件下进行酯化反应1～6h。本发明克服了化学合成法存在的副产物多、腐蚀性强、过程复杂、能量消耗大等缺陷。本发明反应过程简单、条件温和、效率高、无需溶剂、无污染、能耗低和成本低。

公开(公告)号：CN103103177A

公开(公告)日：2013-05-15

申请号：CN201310050672.9

申请日：2013-02-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 熊健 ,  张华 ,  黄亚娟 ,  侯丽云

IPC: C12N11/08

Abstract: 本发明涉及一种反应-吸附耦合固定化氧化还原酶的制备方法。本发明的技术方案涉及在制备聚苯胺载体同时加入氧化酶或还原酶进行吸附的反应-吸附耦合固定化氧化还原酶方法，以苯胺及苯胺衍生物为单体，加入引发剂和助剂，同时加入需固定化的游离氧化酶或还原酶，放置于恒温条件下反应，过滤洗涤得到以聚苯胺为载体的固定化氧化酶或还原酶。本发明克服了现有的固定化氧化还原酶存在的过程复杂，酶与载体的生物相容性较差，共价结合法固定化的氧化还原酶的固定化反应比较剧烈，容易造成酶的失活，导致固定化酶的活力降低等缺陷。本发明具有固定化过程简单，条件温和，效率高；固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力好；固定化的酶稳定性好，使用寿命长。

公开(公告)号：CN109187703A

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201811107372.9

申请日：2018-09-21

Applicant: 扬州大学

Inventor： 汪晓丽 ,  熊健 ,  封克 ,  王小兵

IPC: G01N27/416 ,  G01N27/333

Abstract: 本发明属于离子选择性微电极技术领域，具体涉及一种基于非损伤微测技术（NMT）的铜离子选择性微电极以及植物根尖铜离子流速测定方法，通过向微电极玻璃管内灌入长约1cm的连续无气泡灌充液，灌充液由1mM硝酸铜和0.1mM氯化钾溶液组成；再在显微镜下从尖端吸入一段长约40-50µm的权利要求1所述的铜离子交换剂，并确保铜离子交换剂与灌充液之间无间隙无气泡。采用此配方制作的微电极成功地用于了测定植物根尖表面的铜离子流速。本发明建立了一种可用于NMT技术的Cu2+交换剂配方，在此基础上此制作的离子选择性玻璃微电极具有稳定的斜率和较高的选择性系数，可用于NMT技术测定活体样品表面的铜离子流速。

公开(公告)号：CN103088011A

公开(公告)日：2013-05-08

申请号：CN201310050671.4

申请日：2013-02-06

Applicant: 扬州大学

Inventor： 熊健 ,  候丽云 ,  黄亚娟 ,  张华

IPC: C12N11/08

Abstract: 本发明涉及一种反应-吸附耦合固定化脂肪酶的制备方法。本发明的技术方案是在制备聚苯胺载体同时加入脂肪酶进行吸附的反应-吸附耦合固定化脂肪酶方法，本发明为以苯胺及苯胺衍生物为单体，加入引发剂和助剂，同时加入需固定化的游离脂肪酶，放置于恒温条件下反应，过滤洗涤得到以聚苯胺为载体的固定化脂肪酶。本发明克服了传统的固定化方法存在的固定化过程复杂，酶与载体的生物相容性较差，反应比较剧烈，容易造成酶的失活，导致固定化酶的活力降低，容易造成酶脱落，稳定性差，使用寿命低等缺陷。本发明具有固定化过程简单，条件温和，效率高，固定化酶的蛋白吸附量高，酶活力好，固定化的酶稳定性好，使用寿命长。