公开(公告)号：CN112553200A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202011414852.7

申请日：2020-12-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 包文斌 ,  徐亚菲 ,  吴圣龙 ,  王海飞 ,  吴正常

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  C12N5/10 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种用于敲除猪UGT2C1基因的打靶载体制备方法及其应用，该方法包括以下步骤：(1)根据猪UGT2C1基因设计sgRNA向导序列；(2)将正链sgRNA序列和负链sgRNA序列退火形成双链DNA；将双链DNA与线性化的pGK1.1载体连接获得阳性打靶载体；(3)将阳性打靶载体混合电转染靶细胞IPEC‑J2获得UGT2C1基因敲除的IPEC‑J2细胞。本发明采用CRISPR/Cas9技术敲除IPEC‑J2细胞系基因组中UGT2C1基因序列，建立的UGT2C1基因敲除的IPEC‑J2细胞可为深入揭示UGT2C1基因在疾病抗性中的作用机制及其在猪抗病育种中的应用提供更直接有效的研究模型。