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公开(公告)号：CN106520829A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610903540.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种终止双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的SA-T2A-抗生素筛选基因-PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的SA-T2A-抗生素筛选基因-PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的抗生素基因的相关抗生素筛选至少2周，获取双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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公开(公告)号：CN105441574A
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201610015862.0
申请日：2016-01-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2523/125 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明属于合成DNA甲基化检测领域，具体涉及一种DNA甲基化分析中DNA样本重亚硫酸盐处理转化率的评估方法。本发明分别以梯度稀释的重亚硫酸盐处理和未处理DNA标准品转化与未转化的DNA的Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。设计人工合成与任何物种无同源性的序列作为样本的参考序列，使用SybrGreen法应用上述方法评估所有物种重亚硫酸盐处理样本的转化效率，并对该检测方法进行可靠性评估，结果显示，该方法能够有效地评估DNA样品重亚硫酸盐的转化效率，为广泛物种DNA甲基化准确分析提供了可靠快捷的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113234759A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110552148.6
申请日：2021-05-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：1）、针对人AAVS1位点设计sgRNA并构建sgRNA‑CAG‑hCas9载体；2）、将sgRNA‑CAG‑hCas9载体转染至293T细胞验证sgRNA切割效率；3）、构建含NAMPT基因、抗性基因neo、转录终止序列BGH polyA、启动子EF‑1A重组载体；4）、将步骤2）中切割效率好的sgRNA‑CAG‑hCas9载体与步骤3）中构建的重组载体共转染间充质干细胞，G418筛选得到稳转细胞系；5）、收集高表达NAMPT稳转细胞系培养基，利用外泌体试剂盒提取，得到高表达NAMPT基因的人脐带间充质干细胞外泌体。通过本发明，较于慢病毒构建方法更加安全。
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公开(公告)号：CN106520829B
公开(公告)日：2019-12-17
申请号：CN201610903540.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种终止双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的SA‑T2A‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的SA‑T2A‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的抗生素基因的相关抗生素筛选至少2周，获取双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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公开(公告)号：CN106544360B
公开(公告)日：2019-11-05
申请号：CN201610905097.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供了一种终止lncRNA双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的相关抗生素筛选至少2周，获取lncRNA双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得lncRNA双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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公开(公告)号：CN106544360A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610905097.X
申请日：2016-10-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供了一种终止lncRNA双等位基因转录的方法，包括以下步骤：1)构建分别含有两种不同抗生素筛选基因的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段；2)根据不同靶向基因设计gRNA，构建Cas9/gRNA表达载体；3)在靶向基因中插入步骤1)中所得的CMV‑抗生素筛选基因‑PolyA DNA片段，构建含有靶向基因的同源重组载体；4)导入细胞：将步骤3)中所获得的含有靶向基因的一对同源重组载体，以及步骤2)中所获得的含有靶向基因的Cas9/gRNA表达载体共转染细胞；5)使用步骤1)中所使用的相关抗生素筛选至少2周，获取lncRNA双等位基因被敲除的多克隆细胞株；该方法可以实现以达到在高效定点插入的同时，快速获得lncRNA双等位基因同时敲除的细胞株的目的。
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公开(公告)号：CN105567819A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610017011.X
申请日：2016-01-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2523/125 , C12Q2545/113
Abstract: 本发明涉及一种人源DNA甲基化分析中重亚硫酸盐转化DNA转化效率的评估方法，该方法应用实时PCR TaqMan探针法，分别以梯度稀释的重亚硫酸盐转化和未转化DNA标准品转化与未转化的DNA的Ct值以及对应的DNA拷贝数的标准曲线。使用相同的引物或探针定量检测重亚硫酸盐转化后的DNA样本从而评估转化效率。结果显示该方法可以精确评估人源样本经重亚硫酸盐转化的转化效率。使用已知转化和未转化拷贝数的混合DNA作为模板，证实了TaqMan探针法的可靠性。应用该方法评估不同商业化试剂盒转化人源DNA样本的转效率，显示该方法能够有效地评估DNA样品重亚硫酸盐的转化效率，为人源DNA甲基化准确分析提供了可靠快捷的方法。
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