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公开(公告)号：CN113480664A
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN202110794595.2
申请日：2021-07-14
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提出了一种合成山奈酚的高活性双功能酶，将黄烷酮3‑羟化酶基因f3h和黄酮醇合酶基因fls1同时克隆至原核表达载体pET‑32a(+)，再转化大肠杆菌，以诱导表达重组酶，并利用纯化的重组酶建立无细胞合成体系，实现山奈酚的体外酶促合成。本发明在构建一种高活性双功能酶的基础上，通过优化反应体系成分和反应条件，建立了一种体外高效合成目标分子的方法，显著提高了山奈酚的产量，降低了山奈酚的生产成本。
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公开(公告)号：CN113621629A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110870360.7
申请日：2021-07-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明设计一种基于丙二酰辅酶A再生的柚皮素体外酶促合成方法，在构建乙酰辅酶A合成酶ACS基因与乙酰辅酶A羧化酶ACC1基因的重组表达质粒的基础上，将重组质粒分别转化大肠杆菌和酵母细胞，表达目的蛋白，并将纯化的ACS与ACC1重组蛋白加入柚皮素体外酶促合成体系中，实现了丙二酰辅酶A的再生，以及以4‑香豆酸为底物在体外低成本酶促合成柚皮素。本发明设计了一个新的反应体系，无需添加昂贵的丙二酰辅酶A便能对其进行再生利用，并最终生成柚皮素。
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公开(公告)号：CN107880134B
公开(公告)日：2021-03-23
申请号：CN201711126059.5
申请日：2017-11-15
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种酶促合成山奈酚的方法，其中涉及两种融合蛋白TrxA‑His‑F3H、TrxA‑His‑FLS1的制备及酶活性检测，并设计缓冲液体系，反应缓冲液为0.1 M Tris‑HCl（pH7.2），100μL反应体系中含有0.4%抗坏血酸、10%甘油、8.2 mMα‑酮戊二酸、0.01 mM硫酸亚铁、0.5 mM柚皮素、3.3μg TrxA‑His‑F3H、1.8μg TrxA‑His‑FLS1；并通过优化反应体系pH值、反应时间和温度，在体外建立一步高效合成山奈酚的方法。CCK‑8法检测合成的山奈酚对肿瘤细胞生长的抑制作用。
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公开(公告)号：CN111394352B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202010211699.1
申请日：2020-03-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , A61K31/713 , A61P35/00
Abstract: 本发明提出了一种PDCD11‑shRNA，为根据核仁蛋白PDCD11的基因序列设计的针对PDCD11的shRNA分子，能够显著抑制人结直肠癌细胞HCT116的生长。本发明PDCD11‑shRNA的序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的优点是能显著降低HCT116肿瘤细胞内PDCD11的表达水平，显著抑制细胞的增殖速率。因此，本发明设计的shPDCD11分子具有治疗结直肠癌的潜能。
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公开(公告)号：CN113528471A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110817915.1
申请日：2021-07-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提出了一种从头合成黄烷酮的高活性三功能酶，将4‑香豆酰辅酶A连接酶基因和查尔酮异构酶基因、查尔酮合酶基因克隆至原核表达载体构建重组质粒，再转化大肠杆菌，以诱导表达重组酶，并利用纯化的重组酶建立无细胞合成体系，实现黄烷酮的体外酶促合成。本发明克服了黄烷酮的体外多酶合成体系中产量和底物转化率较低的问题，同时建立一种成分简单的体外酶促合成体系，不存在工程菌细胞内复杂的调控作用，反应过程易于精确控制、副产物少、产品分离相对简单、生产周期明显缩短、生产成本显著降低。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111304206A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010211578.7
申请日：2020-03-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , A61K31/713 , A61P1/00 , A61P35/00
Abstract: 本发明提出了一种RPL6-shRNA分子，为针对核糖体蛋白RPL6的核苷酸序列设计的shRNA分子，能够显著抑制结直肠癌细胞HCT116的生长。RPL6-shRNA的序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。本发明的优点是能显著降低HCT116肿瘤细胞内RPL6的表达水平，高效抑制体外培养的HCT116细胞增殖速率。因此，本发明设计的shRPL6分子具有治疗结直肠癌的潜能。
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公开(公告)号：CN107880134A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711126059.5
申请日：2017-11-15
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12N9/0071 , C07K2319/21 , C07K2319/35 , C12N9/1029 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12P17/06 , C12Y114/11009 , C12Y203/01041
Abstract: 本发明公开了一种酶促合成山奈酚的方法，其中涉及两种融合蛋白TrxA-His-F3H、TrxA-His-FLS1的制备及酶活性检测，并设计缓冲液体系，反应缓冲液为0.1M Tris-HCl（pH7.2），100μL反应体系中含有0.4%抗坏血酸、10%甘油、8.2 mMα-酮戊二酸、0.01 mM硫酸亚铁、0.5 mM柚皮素、3.3μg TrxA-His-F3H、1.8μg TrxA-His-FLS1；并通过优化反应体系pH值、反应时间和温度，在体外建立一步高效合成山奈酚的方法。CCK-8法检测合成的山奈酚对肿瘤细胞生长的抑制作用。
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公开(公告)号：CN113621629B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110870360.7
申请日：2021-07-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明设计一种基于丙二酰辅酶A再生的柚皮素体外酶促合成方法，在构建乙酰辅酶A合成酶ACS基因与乙酰辅酶A羧化酶ACC1基因的重组表达质粒的基础上，将重组质粒分别转化大肠杆菌和酵母细胞，表达目的蛋白，并将纯化的ACS与ACC1重组蛋白加入柚皮素体外酶促合成体系中，实现了丙二酰辅酶A的再生，以及以4‑香豆酸为底物在体外低成本酶促合成柚皮素。本发明设计了一个新的反应体系，无需添加昂贵的丙二酰辅酶A便能对其进行再生利用，并最终生成柚皮素。
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公开(公告)号：CN111394352A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010211699.1
申请日：2020-03-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113 , A61K31/713 , A61P35/00
Abstract: 本发明提出了一种PDCD11-shRNA，为根据核仁蛋白PDCD11的基因序列设计的针对PDCD11的shRNA分子，能够显著抑制人结直肠癌细胞HCT116的生长。本发明PDCD11-shRNA的序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的优点是能显著降低HCT116肿瘤细胞内PDCD11的表达水平，显著抑制细胞的增殖速率。因此，本发明设计的shPDCD11分子具有治疗结直肠癌的潜能。
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