公开(公告)号：CN102127143A

公开(公告)日：2011-07-20

申请号：CN201010606983.5

申请日：2010-12-27

Applicant: 广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 梁达奉 ,  颜江华 ,  曾练强 ,  蚁细苗 ,  李雨虹 ,  王生育 ,  张远平 ,  黄玉南 ,  钟映萍

IPC: C07K1/113 ,  C07K14/765 ,  C07K16/18

Abstract: 本发明公开了一种α-葡聚糖抗原及特异性单克隆抗体的制备方法。抗原的制备方法，包括将α-葡聚糖与蛋白混合，用水溶解，调节溶液的pH为5～8，冷冻干燥，研磨成粉；将粉末置于50～60℃的恒温，相对温度为60～90%，至少反应3天，得到α-葡聚糖抗原。抗体的制备方法包括使用制备得到的抗原与佐剂混合，乳化，注射到动物体内；选取血清效价高动物体的脾细胞与瘤细胞融合，得到可分泌抗体的杂交瘤细胞；使用杂交瘤细胞生产或腹水法生产抗体。本发明方法制备的抗原，免疫原性高，可有效地诱导产生免疫反应，获得性能优异的抗体。本发明的抗体，可与α-葡聚糖特异性反应，产生肉眼可见的沉淀，效价高，可用于α-葡聚糖的定量分析。

公开(公告)号：CN102153651A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN201110023901.9

申请日：2011-01-21

Applicant: 厦门大学 ,  广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 颜江华 ,  曾练强 ,  王生育 ,  倪二茹 ,  梁达奉

IPC: C07K16/44 ,  C07K1/22 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70

Abstract: 抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。涉及抗葡聚糖的抗体，提供抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。克隆抗葡聚糖单链抗体基因，并将其导入载体，构建重组载体；将重组载体导入宿主细菌，构建表达抗葡聚糖单链抗体的重组工程菌；重组工程菌发酵培养，分离纯化发酵液，即得抗葡聚糖单链抗体。利用抗葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞株D9，通过RT-PCR技术，获得了该抗体的重、轻链可变区序列，进一步组装成抗葡聚糖单链抗体基因，并构建重组表达载体pET-22(b+)-scFv，进行抗葡聚糖单链抗体的表达、纯化与鉴定。在基因工程技术的大背景下，抗葡聚糖单链抗体的获得将有助于未来该抗体的进一步开发和应用。

公开(公告)号：CN102153651B

公开(公告)日：2012-11-14

申请号：CN201110023901.9

申请日：2011-01-21

Applicant: 厦门大学 ,  广州甘蔗糖业研究所

Inventor： 颜江华 ,  曾练强 ,  王生育 ,  倪二茹 ,  梁达奉

IPC: C07K16/44 ,  C07K1/22 ,  C12N15/13 ,  C12N15/70

Abstract: 抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。涉及抗葡聚糖的抗体，提供抗葡聚糖单链抗体及其制备方法。克隆抗葡聚糖单链抗体基因，并将其导入载体，构建重组载体；将重组载体导入宿主细菌，构建表达抗葡聚糖单链抗体的重组工程菌；重组工程菌发酵培养，分离纯化发酵液，即得抗葡聚糖单链抗体。利用抗葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞株D9，通过RT-PCR技术，获得了该抗体的重、轻链可变区序列，进一步组装成抗葡聚糖单链抗体基因，并构建重组表达载体pET-22(b+)-scFv，进行抗葡聚糖单链抗体的表达、纯化与鉴定。在基因工程技术的大背景下，抗葡聚糖单链抗体的获得将有助于未来该抗体的进一步开发和应用。