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公开(公告)号：CN114774492B
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202210582177.1
申请日：2022-05-26
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种利用黑曲霉表达红发夫酵母6G‑β‑呋喃果糖苷酶生产新科斯糖的方法，是制备红发夫酵母来源6G‑β‑呋喃果糖苷酶Xd‑INV置换型表达盒，将该表达盒转化进入黑曲霉ATCC 20611构建表达异源6G‑β‑呋喃果糖苷酶Xd‑INV的工程菌种INC1，并发酵生产含Xd‑INV的菌丝体，利用制得的菌丝体以蔗糖为底物制备新科斯糖。实验证实：本发明构建的工程菌发酵产的含酶菌丝体中酶活力达到246.53U/g，菌丝体直接用于制备新科斯糖，产量达275.4g/L，具有较高的应用和推广价值，有助于扩大和推动新科斯糖的产业化进程。
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公开(公告)号：CN114806903B
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202210581356.3
申请日：2022-05-26
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种纤维素酶表达和分泌能力同步提升的里氏木霉工程菌株QCDS，该菌株是以里氏木霉QEB4为出发菌株，在其基因组中构建了含有以组成型启动子Pcdna1表达的xyr1基因即xyr1过表达盒，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示，同时含有以纤维素诱导型启动子Pegl2表达的sec63基因即sec63过表达盒，其核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了所述菌株在发酵生产纤维素酶中的应用和所述菌株发酵产物纤维素酶液在水解生物质材料提升糖化后葡萄糖释放量中的应用。实验证实本发明的工程菌株纤维素酶表达和分泌能力均显著提升，纤维素酶活力达到27.1IU/mL，在纤维素酶生产和用于木质纤维素生物质材料的降解中具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN113913443A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111480553.8
申请日：2021-12-06
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种利用纤维素诱导型启动子提高里氏木霉纤维素水解酶活的方法，是制备利用纤维素诱导型启动子Pegl2过表达转录调控因子xyr1基因的表达盒，将其转化到里氏木霉QEB4菌株中得到高纤维素水解酶活里氏木霉工程菌株QE2X，并利用该工程菌株发酵制备高活性的纤维素水解酶。实验证实利用本发明方法生产的纤维素水解酶活性为34.9IU/mg，显著高于出发菌株QEB4(10IU/mg)，酶系各组分均大幅提升，并且β‑葡萄糖苷酶的酶活为92.4IU/mg，为出发菌株的2.83倍。本发明具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN107418903A
公开(公告)日：2017-12-01
申请号：CN201710500905.9
申请日：2017-06-27
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种表达葡萄糖氧化酶的低聚果糖合成工程菌株，是基因组中含有融合基因gox-fopA-C的工程菌；其中，所述工程菌株的出发菌是黑曲霉ATCC 20611，融合基因gox-fopA-C是葡萄糖氧化酶GOX编码基因gox与β-呋喃果糖苷酶FopA-C端结构域编码基因fopA-C融合获得，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其上游为构巢曲霉的三磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA，下游为构巢曲霉色氨酸终止子TtrpC。本发明还公开了所述工程菌在制备低聚果糖中的应用，实验证实：该工程菌葡萄糖氧化酶活力达到90.0U/g，β-呋喃果糖苷酶活力达到380U/g，菌丝体直接用于制备低聚果糖，其含量达到71.2％。本发明操作简便，可实现菌丝体一步酶法制备较高纯度的低聚果糖，具有较好的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN105176833A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510484372.0
申请日：2015-08-07
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一株产纤维素酶的木霉菌株，其是由里氏木霉(T.reesei)RUT-C30紫外诱变获得，该菌株命名为里氏木霉(Trichoderma reesei)CU7-4，菌株已于2015年07月10日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC N0.11065。本发明还公开了所述菌株在发酵生产纤维素酶酶液中的应用，实验证实本发明的菌株最高滤纸酶活为8.28IU/mL，是出发菌株的3.43倍；最高总蛋白为4.14mg/mL，是出发菌株的1.92倍，预示该菌株在纤维素酶生产中有较好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114806903A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210581356.3
申请日：2022-05-26
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种纤维素酶表达和分泌能力同步提升的里氏木霉工程菌株QCDS，该菌株是以里氏木霉QEB4为出发菌株，在其基因组中构建了含有以组成型启动子Pcdna1表达的xyr1基因即xyr1过表达盒，其核酸序列如SEQ ID NO.1所示，同时含有以纤维素诱导型启动子Pegl2表达的sec63基因即sec63过表达盒，其核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了所述菌株在发酵生产纤维素酶中的应用和所述菌株发酵产物纤维素酶液在水解生物质材料提升糖化后葡萄糖释放量中的应用。实验证实本发明的工程菌株纤维素酶表达和分泌能力均显著提升，纤维素酶活力达到27.1IU/mL，在纤维素酶生产和用于木质纤维素生物质材料的降解中具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN113980938A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202111385602.X
申请日：2021-11-22
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种获取高产高稳定性异源β‑葡萄糖苷酶的方法，步骤是制备vib1敲除表达盒，将该表达盒转化进入里氏木霉QM53的原生体中构建蛋白背景降低的里氏木霉底盘菌株Δvib1，制备黑曲霉来源β‑葡萄糖苷酶(BGLA)过表达盒并转化底盘菌株Δvib1构建表达异源β‑葡萄糖苷酶的工程菌株QVB‑1，优化培养条件发酵菌株QVB‑1生产β‑葡萄糖苷酶。实验证实利用本发明方法生产的异源β‑葡萄糖苷酶活性为65.4IU/mg，显著高于出发菌株QM53(1.1IU/mg)，并且胞外背景更加纯净，蛋白纯度高。同时本发明的方法能保持异源β‑葡萄糖苷酶稳定性，菌株QVB‑1的发酵上清液孵育4周后，其分泌的β‑葡萄糖苷酶活力保持稳定不变，而对照组β‑葡萄糖苷酶活力下降程度超过放置前的60％。本发明应用前景良好。
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公开(公告)号：CN109852554A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201811592006.7
申请日：2018-12-25
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一株内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶双高分泌的里氏木霉基因工程菌，命名为里氏木霉(Trichoderma reesei)QMEB5，该菌株基因型为QM9414ΔEegl2ΔEbgl1，是以里氏木霉QM9414为出发菌，转化含内切葡聚糖酶2的基因表达盒的融合基因表达载体pTeg2，再转化含有β-葡萄糖苷酶基因表达盒的质粒pTHB后筛选、验证获得。本发明还公开了所述工程菌株在发酵生产纤维素酶中的应用，实验证实该工程菌株的egl2的表达量较出发菌株提高了27倍，而bgl1的表达量则提高了410倍，内切葡聚糖酶和β-葡萄糖甘酶活力分别为117.5IU/mL和34.5IU/mL。其发酵生产纤维素酶系可以高效应用于玉米芯以及其他木质纤维素酶材料的降解，具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN110951628B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN201911394283.1
申请日：2019-12-30
Applicant: 乐陵胜利新能源有限责任公司 , 山东大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别公开了一种用于秸秆降解的高β‑葡萄糖苷酶活力里氏木霉工程菌株的构建方法及应用。该构建方法，其特征在于：所述工程菌株基因组中含有来自黑曲霉β‑葡萄糖苷酶变体编码基因mbglA，其基因型为QM9414OEmbglA，是以里氏木霉QM9414为出发菌，转化含黑曲霉β‑葡萄糖苷酶变体编码基因mbglA的表达盒Pcbh1‑mbglA‑TbglA后筛选、验证获得。本发明还公开了该工程菌株在发酵生产纤维素酶中的应用，证实该工程菌株为目前最高β‑葡萄糖苷酶活力的里氏木霉工程菌株；其发酵生产的纤维素酶系可以高效应用于玉米秸秆降解糖化，具有良好的工业开发和应用前景。
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公开(公告)号：CN114807267A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210581362.9
申请日：2022-05-26
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明公开了一种同时制备新科斯糖和1F‑低聚果糖的方法，是制备红发夫酵母来源6G‑β‑呋喃果糖苷酶Xd‑INV基因表达盒，将该表达盒转化进入黑曲霉ATCC 20611构建共表达异源6G‑β‑呋喃果糖苷酶Xd‑INV和β‑呋喃果糖苷酶FopA的工程菌株INCF‑1，并发酵生产含Xd‑INV和FopA的菌丝体，利用制得的菌丝体以蔗糖为底物同时制备新科斯糖和1F‑低聚果糖。实验证实：本发明构建的工程菌发酵产的含β‑呋喃果糖苷酶(Xd‑INV和FopA)菌丝体酶活力可达到446.72U/g，菌丝体直接用于制备新科斯糖和1F‑低聚果糖，产量达349.8g/L，具有较高的应用和推广价值，有助于扩大低聚果糖的产业化进程。
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