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公开(公告)号：CN118546967A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410722959.X
申请日：2024-06-05
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种区室化蛋白原料的生产方法，属于生物技术领域。本发明首先将能自发组装的FIB1(IDR)的基因片段与荧光蛋白的基因片段和RIAD短肽的基因片段通过连接序列进行连接，得到重组基因片段，插入到质粒载体中，获得重组质粒载体；然后将RIDD的基因片段与目的蛋白的基因片段通过柔性连接序列进行连接，得到重组基因片段，插入到质粒载体中，获得重组质粒载体；将上述2个重组质粒载体共同转化入宿主细胞中，培养并依次诱导表达液滴蛋白FIB1(IDR)‑荧光蛋白‑RIAD和带有RIDD的目的蛋白，分离纯化获得目的蛋白。本发明的方法逆转了毒蛋白对宿主的毒害作用并提升了毒蛋白的表达量。因此，本发明为毒蛋白的大规模生产提供了一种可行的方法。
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公开(公告)号：CN114280189A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202111601848.6
申请日：2021-12-24
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种快速、定量分析微生物细胞工厂发酵代谢产物的方法，属于生物技术领域。本发明在大肠杆菌宿主中构建甲羟戊酸途径与番茄红素合成途径，获得能够生物合成番茄红素的大肠杆菌，发酵后，离心收集菌体、淬灭处理，提取获得待检样品，通过LC‑MS进行定性定量分析。本发明的优点在于仅通过一种方法就可以对样品中的CoA、Ac‑CoA、AcAc‑CoA、HMG‑CoA、MVA、MVA‑5P、IPP、GPP、FPP、GGPP共十种化合物进行定性定量分析，提供了一种精密度高，灵敏度好的高效检测方法，大大简化了以往的检测方法，降低检测成本，有利于从复杂的基质中提取并定量检测多种目标化合物。
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公开(公告)号：CN115850507A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202210994072.7
申请日：2022-08-18
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种正交、双组份蛋白质自组装偶联体系及其构建方法，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明通过构建DogTag‑linker‑mi3‑linker‑SpyTag重组工程菌、DogCatcher‑linker‑YFP重组工程菌和SpyCatcher‑linker‑CFP重组工程菌，然后进行表达，得到DogTag‑linker‑mi3‑linker‑SpyTag融合蛋白、DogCatcher‑linker‑YFP融合蛋白和SpyCatcher‑linker‑CFP融合蛋白，将上述三种蛋白在体外混合进行自组装，得到mi3‑CFP‑YFP蛋白复合物。将该方法应用到大肠杆菌胞内，也有较好的组装效果。本发明为构建人工仿生多酶复合物、降低目的产物的合成成本、提高生产效率提供了技术支持。
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公开(公告)号：CN115073615A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210785290.X
申请日：2022-06-29
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
IPC: C07K19/00 , C12N9/90 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/04 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N9/12 , C12N9/02 , C12P5/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种可提高细胞工厂催化效率的人工类细胞器的构建方法，属于生物技术领域。本发明以蛋白质笼Mi3做为支架，通过融合表达Spycatcher，对其表面进行修饰，利用SpyCatcher多肽与SpyTag多肽之间自发形成的异肽键，招募带有SpyTag‑酶分子，获得人工类细胞器；将蛋白质笼Mi3‑SpyCatcher与维生素K12合成途径中带有SpyTag的三个顺序酶MenFST、MenDST、MenHST在胞外混合进行自组装，所得的类细胞器催化效率较游离酶提高一倍；在大肠杆菌BL21(DE3)中共表达蛋白质笼Mi3‑SpyCatcher与甲羟戊酸途径中带有SpyTag的三个顺序酶HMGRST、HMGSST、AtoBST)，并构建番茄红素合成通路，发酵结果显示，含有人工类细胞器的工程菌株中番茄红素产量较对照菌株提高8倍。
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公开(公告)号：CN115850507B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210994072.7
申请日：2022-08-18
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种正交、双组份蛋白质自组装偶联体系及其构建方法，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明通过构建DogTag‑linker‑mi3‑linker‑SpyTag重组工程菌、DogCatcher‑linker‑YFP重组工程菌和SpyCatcher‑linker‑CFP重组工程菌，然后进行表达，得到DogTag‑linker‑mi3‑linker‑SpyTag融合蛋白、DogCatcher‑linker‑YFP融合蛋白和SpyCatcher‑linker‑CFP融合蛋白，将上述三种蛋白在体外混合进行自组装，得到mi3‑CFP‑YFP蛋白复合物。将该方法应用到大肠杆菌胞内，也有较好的组装效果。本发明为构建人工仿生多酶复合物、降低目的产物的合成成本、提高生产效率提供了技术支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117253547A
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202311103996.4
申请日：2023-08-30
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种基于人工蛋白质笼的可控蛋白招募体系及其构建方法，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明以Mi3作为支架蛋白，通过基因融合的方式在支架蛋白上连接FKBP短肽，对Mi3外表面进行修饰加工，获得一种响应雷帕霉素刺激的Mi3chem；同时利用小分子雷帕霉素介导FK506结合蛋白(FKBP)和FRB非共价键异二聚化的性质，在添加雷帕霉素的情况下，实现Mi3chem上招募带有FRB标签的货物蛋白，在胞外和胞内构建的蛋白质笼都有较好的招募效果。本发明实现了对目的蛋白进行可控的招募过程，为高效生产提供了新思路及新途径。
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公开(公告)号：CN117070544B
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202310985560.6
申请日：2023-08-07
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种基于人工蛋白质笼的光响应可逆蛋白组装体系及其构建方法，属于生物技术领域。所述光响应可逆蛋白组装体系可以响应450nm波长的蓝光。在蓝光光照条件下，携带有SspB结构域的货物蛋白可以迅速组装到带有LOV2结构域的Mi3蛋白质笼(Mi3Opto)的表面；当蓝光去除后，带有SspB结构域的货物蛋白又可以从蛋白质笼表面快速解离。该光响应可逆蛋白组装体系可以在经历多次光照与黑暗循环之后依旧保持高的感光活性。进一步的，该光响应可逆蛋白组装体系不论在胞外试管环境还是复杂的细胞质环境中都具有优异的感光活性，与较高的组装效率，具备很高的应用价值。本发明为人工类细胞器的构建、光控蛋白质纯化系统的开发以及新型疫苗平台的合成等研究提供了技术支持和理论依据。
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公开(公告)号：CN115073615B
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202210785290.X
申请日：2022-06-29
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
IPC: C07K19/00 , C12N9/90 , C12N9/10 , C12N9/88 , C12N9/04 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N9/12 , C12N9/02 , C12P5/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种可提高细胞工厂催化效率的人工类细胞器的构建方法，属于生物技术领域。本发明以蛋白质笼Mi3做为支架，通过融合表达Spycatcher，对其表面进行修饰，利用SpyCatcher多肽与SpyTag多肽之间自发形成的异肽键，招募带有SpyTag‑酶分子，获得人工类细胞器；将蛋白质笼Mi3‑SpyCatcher与维生素K12合成途径中带有SpyTag的三个顺序酶MenFST、MenDST、MenHST在胞外混合进行自组装，所得的类细胞器催化效率较游离酶提高一倍；在大肠杆菌BL21(DE3)中共表达蛋白质笼Mi3‑SpyCatcher与甲羟戊酸途径中带有SpyTag的三个顺序酶HMGRST、HMGSST、AtoBST)，并构建番茄红素合成通路，发酵结果显示，含有人工类细胞器的工程菌株中番茄红素产量较对照菌株提高8倍。
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公开(公告)号：CN117660508A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311674073.4
申请日：2023-12-07
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种介观尺度的无膜细胞器及其构建方法，属于生物技术领域。本发明将RIAD短肽序列和具有内在无序区的FIB1(IDR)‑sfGFP序列相结合，以表达后的FIB1(IDR)‑sfGFP‑RIAD蛋白作为支架，通过蛋白内在无序区间的弱多价相互作用形成基于液液相分离的液滴，目的蛋白在融合RIDD标签后，可以通过RIAD与RIDD亲和短肽对间的相互作用，被精准地招募到液滴中，从而构建出一种可以特异性富集目的蛋白的无膜细胞器FIB1(IDR)。FIB1(IDR)在生理盐浓度下形态稳定，直径约为2微米，属于介观尺度的人工无膜细胞器。本发明使用FIB1(IDR)特异性招募并富集β‑半乳糖苷酶(β‑Gal)，使得β‑Gal催化效率提高了2.75倍。本发明提供了一种廉价易得、酶载量高、结构稳定、生物相容性良好、催化效果优异的介观尺度人工无膜细胞器的体外构建方法。
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公开(公告)号：CN117070544A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202310985560.6
申请日：2023-08-07
Applicant: 大连理工大学 , 大连理工大学宁波研究院
Abstract: 本发明公开了一种基于人工蛋白质笼的光响应可逆蛋白组装体系及其构建方法，属于生物技术领域。所述光响应可逆蛋白组装体系可以响应450nm波长的蓝光。在蓝光光照条件下，携带有SspB结构域的货物蛋白可以迅速组装到带有LOV2结构域的Mi3蛋白质笼(Mi3Opto)的表面；当蓝光去除后，带有SspB结构域的货物蛋白又可以从蛋白质笼表面快速解离。该光响应可逆蛋白组装体系可以在经历多次光照与黑暗循环之后依旧保持高的感光活性。进一步的，该光响应可逆蛋白组装体系不论在胞外试管环境还是复杂的细胞质环境中都具有优异的感光活性，与较高的组装效率，具备很高的应用价值。本发明为人工类细胞器的构建、光控蛋白质纯化系统的开发以及新型疫苗平台的合成等研究提供了技术支持和理论依据。
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