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公开(公告)号：CN103555657A
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201310538211.6
申请日：2013-11-04
Applicant: 大连海洋大学
Abstract: 本发明提供一种四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF及其建立方法。所述细胞系于2013年8月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：C2013111。所述四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF支持鲤春病毒血症病毒的生长和复制。所述四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF的生物学特性包括：细胞为成纤维细胞样、胞浆丰富贴壁生长、具接触抑制生长特性；细胞倍增时间为41.45小时；特征染色体数目为100条。
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公开(公告)号：CN101864414A
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN201010223407.2
申请日：2010-07-12
Applicant: 大连海洋大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开一种提取纯度高、完整性好、得率高的仿刺参体壁总RNA的方法，具体方法是取仿刺参体壁组织至液氮中速冻；将速冻的组织研磨后置入裂解液中匀浆、离心，取上清；向上清中加入氯仿，再离心取上清至另一离心管中；再加入高盐溶液及异丙醇，所得沉淀用乙醇洗涤；用DEPC处理水溶解沉淀并定容；向所得溶解液中依次加入无RNA酶的DNA酶缓冲液、无RNA酶的DNA酶及RNA酶抑制剂混匀，37℃水浴得DNA裂解液；向DNA裂解液中加入酚∶氯仿(5∶1)混匀，离心取上清；向上清液中加入糖原溶液、醋酸钾溶液及预冷的无水乙醇，混匀过夜后离心弃上清，沉淀用乙醇洗涤、干燥；用DEPC处理水溶解最终沉淀物并定容至20μL，-80℃保存。
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公开(公告)号：CN103525749B
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201310538151.8
申请日：2013-11-04
Applicant: 大连海洋大学
Abstract: 本发明提供一种三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF及其建立方法。所述三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF于2013年8月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为C2013110。所述三倍体泥鳅鳍细胞系具有对鲤春病毒血症病毒的易感性。所述三倍体泥鳅鳍细胞系的生物学特性包括:细胞为成纤维细胞样、胞浆丰富贴壁生长、具有接触抑制生长特性，细胞倍增时间为36.01小时，特征染色体数目为75条。
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公开(公告)号：CN103525749A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310538151.8
申请日：2013-11-04
Applicant: 大连海洋大学
Abstract: 本发明提供一种三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF及其建立方法。所述三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF于2013年8月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为C2013110。所述三倍体泥鳅鳍细胞系具有对鲤春病毒血症病毒的易感性。所述三倍体泥鳅鳍细胞系的生物学特性包括:细胞为成纤维细胞样、胞浆丰富贴壁生长、具有接触抑制生长特性，细胞倍增时间为36.01小时，特征染色体数目为75条。
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公开(公告)号：CN104087567B
公开(公告)日：2017-04-12
申请号：CN201410196291.6
申请日：2014-05-12
Abstract: 本发明公开一种菲律宾蛤仔抗菌蛋白的制备方法，以如SEQ ID NO：1 所示cDNA为模板、以具有EcoR I 和NotⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；上游引物EcoR I：5'‑ GAATTCATGGCTTGGCTGACAGCATCTG ‑3' 下游引物NotⅠ：5'‑ GCGGCCGCTTATTTGTCTTTAACAGCTCTC ATTCTGC ‑3'；将PCR反应产物与克隆载体相接，并转化到感受态细胞；提取所得克隆和表达载体质粒，分别用EcoR I和Not I双酶切，胶回收目的片段后用连接酶连接，再转化到感受态细胞；提取阳性克隆并将所得阳性克隆进行IPTG诱导表达；对表达的重组蛋白进行提取并纯化。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106332815A
公开(公告)日：2017-01-18
申请号：CN201610774632.2
申请日：2016-08-31
Applicant: 大连海洋大学
IPC: A01K61/51
CPC classification number: Y02A40/82
Abstract: 本发明公开一种操作简单、可提高受精率的体外诱导鲍精子受精方法，依次按如下步骤进行：煮沸过滤海水并冷却至21℃，加入体积浓度为25%~28%的氨水至氨水体积浓度为0.005‰~0.04‰，制成激活液，将激活液置于密闭容器再置于21℃水浴中，备用；取备用的激活液置于烧杯中，再取成熟雄性种鲍的精巢组织放入激活液中2min，所述激活液与精巢组织的比例为100ml：1g；迅速将从精巢中游离出来的精子悬液吸出，并用海水稀释至1500个/ml，加入盛放卵子的容器中，保持水温21℃。
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公开(公告)号：CN103555657B
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201310538211.6
申请日：2013-11-04
Applicant: 大连海洋大学
Abstract: 本发明提供一种四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF及其建立方法。所述细胞系于2013年8月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：C2013111。所述四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF支持鲤春病毒血症病毒的生长和复制。所述四倍体泥鳅鳍细胞系TEMF的生物学特性包括：细胞为成纤维细胞样、胞浆丰富贴壁生长、具接触抑制生长特性；细胞倍增时间为41.45小时；特征染色体数目为100条。
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公开(公告)号：CN103525749A9
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201310538151.8
申请日：2013-11-04
Applicant: 大连海洋大学
Abstract: 本发明提供一种三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF及其建立方法。所述三倍体泥鳅鳍细胞系TRMF于2013年8月19日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为C2013110。所述三倍体泥鳅鳍细胞系具有对鲤春病毒血症病毒的易感性。所述三倍体泥鳅鳍细胞系的生物学特性包括:细胞为成纤维细胞样、胞浆丰富贴壁生长、具有接触抑制生长特性，细胞倍增时间为36.01小时，特征染色体数目为75条。
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公开(公告)号：CN102925407B
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201210477608.4
申请日：2012-11-22
Applicant: 大连海洋大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明公开了一种三倍体泥鳅鳍细胞的体外培养方法，按如下步骤进行：选择DMEM/F12培养基，并加入胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子、I型胰岛素样生长因子、表皮生长因子和硫酸软骨素制备细胞培养液；在工作台上取三倍体泥鳅的鳍并用碘伏、双抗等漂洗处理，在细胞培养瓶中进行原代培养；待细胞长成单层后制成细胞悬液并加入培养基进行传代培养。步骤简单，易操作；所培养的三倍体泥鳅鳍细胞的形态为纤维样，可以连续传代并直接应用于多倍体鱼类生物学研究、病毒分离扩增、疫苗研制及功能基因研究。
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公开(公告)号：CN104087567A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410196291.6
申请日：2014-05-12
CPC classification number: C12N9/2462 , C12N15/70 , C12Y302/01017
Abstract: 本发明公开一种菲律宾蛤仔抗菌蛋白的制备方法，以如SEQIDNO：1所示cDNA为模板、以具有EcoRI和NotⅠ两个酶切位点的PCR反应引物进行PCR反应；上游引物EcoRI：5'-GAATTCATGGCTTGGCTGACAGCATCTG-3'下游引物NotⅠ：5'-GCGGCCGCTTATTTGTCTTTAACAGCTCTCATTCTGC-3'；将PCR反应产物与克隆载体相接，并转化到感受态细胞；提取所得克隆和表达载体质粒，分别用EcoRI和NotI双酶切，胶回收目的片段后用连接酶连接，再转化到感受态细胞；提取阳性克隆并将所得阳性克隆进行IPTG诱导表达；对表达的重组蛋白进行提取并纯化。
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